Ames tests n - nitrozamīniem: mutagenicitātes novērtēšana

Ievads Ames testā

AMES tests, kas pazīstams arī kā baktēriju reversās mutācijas tests, ir plaši izmantots bioloģiskajā testā, kas novērtē ķīmisko savienojumu mutagēno potenciālu, ieskaitot n - nitrosamīnus. Šajā testā, ko 1970. gados izstrādājis Dr. Brūss Ames, tiek izmantoti specifiski baktērijas Salmonella typhimurium celmi, kas satur mutācijas gēnos, kas iesaistīti histidīna sintēzē. Pārbaude nosaka, vai viela var izraisīt baktēriju DNS mutācijas, nodrošinot indikāciju par potenciālu kancerogenitāti cilvēkiem.

N - nitrozamīnu AMES testa atbilstība

N - nitrozamīni ir pazīstami ar to genotoksiskajām un kancerogēnajām īpašībām, jo ​​tie var izraisīt DNS bojājumus, izmantojot alkilēšanu un oksidatīvo stresu. AMES tests ir īpaši noderīgs, lai noteiktu to mutagēno iedarbību, jo daudziem n - nitrozamīniem nepieciešama metaboliska aktivācija, izmantojot fermentatīvu pārvēršanu, lai veidotu ļoti reaģējošus elektrofīlus starpproduktus, kas spēj mijiedarboties ar DNS. Šī aktivācija parasti notiek aknās caur citohroma P450 enzīmiem. Lai atkārtotu šo metabolisma pārvēršanu in vitro, testu bieži veic ar metabolisma aktivizāciju un bez tās, izmantojot S9 maisījumu, aknu enzīmu preparātu, kas iegūts no grauzējiem, kas imitē zīdītāju metabolismu un pastiprina mutagēnas aktivitātes noteikšanu.

Ames testa metodika

Ames testa standarta procedūra ietver šādas darbības:

1. 1. Testa celmu sagatavošana: tiek izmantoti Salmonella typhimurium celmi ar iepriekš esošām mutācijām histidīna sintēzes gēnos. Šie celmi nevar augt bez ārēja histidīna avota, ja vien reversā mutācija neatjauno funkciju.
2. 2. N - nitrozamīnu iedarbība: baktēriju kultūru sajauc ar testa savienojumu (n - nitrosamīns) uz minimālās agara plāksnes, kas satur nelielu daudzumu histidīna.
3. 3. Metabolisma aktivizēšana (S9 sajaukšanas pievienošana): Lai ņemtu vērā metabolisma pārvēršanu cilvēka ķermenī, daži testa paraugi ietver S9 frakciju, fermentatīvu ekstraktu no žurku aknu mikrosomām.
4. 4. Inkubācija un augšana: plāksnes 48 stundas inkubē 37 ° C temperatūrā, ļaujot baktēriju kolonijām augt, ja rodas mutācijas, kas atjauno histidīna sintēzi.
5. 5. Koloniju skaitīšana un analīze: tiek skaitīts revertējošo koloniju skaits (baktērijas, kas atgūst spēju ražot histidīnu) tiek saskaitītas un salīdzinātas ar kontroles plāksnēm.
6. Rezultātu interpretācija

• Pozitīvs AMES tests: ievērojams revertējošo koloniju pieaugums salīdzinājumā ar kontroli liek domāt, ka savienojums izraisa mutācijas, kas nozīmē mutagēniskas un potenciāli kancerogēnas īpašības.
• Negatīvs AMES tests: ja netiek novērots būtisks pieaugums, testa apstākļos savienojums, iespējams, nav - mutagēns.
• Deva - Atbildes attiecības: lielākas devas, kas palielina mutāciju līmeni, stiprina mutagenitātes pierādījumus.

Secinājums

AMES tests ir ātra un izmaksu - Efektīva metode n - nitrozamīnu mutagenicitātes novērtēšanai. Ņemot vērā viņu saistību ar vēzi, regulatīvā kontrole un riska novērtēšanai ir izšķiroša nozīme to mutagēno īpašību identificēšanā, izmantojot šo testu. Šis tests joprojām ir toksikoloģiskās skrīninga un ķīmiskās drošības novērtēšanas stūrakmens.

Atslēgas vārdi: n - nitrozamīni, ndsris, OECD 471, pastiprināts AMES tests, kāmja aknas S9, citohroma P450 enzīmi, mutācijas pārbaude