Test AMES dla N - Nitrozaminy: Ocena mutagenności

Wprowadzenie do testu Ames

Test AMES, znany również jako test bakteryjny odwrotnej mutacji, jest powszechnie stosowany do testu biologicznego, który ocenia potencjał mutagenny związków chemicznych, w tym N - nitrozaminy. Opracowany przez dr Bruce'a Amesa w latach siedemdziesiątych, ten test wykorzystuje określone szczepy bakterii Salmonella Typhimurium, które niosą mutacje w genach zaangażowanych w syntezę histydyny. Test określa, czy substancja może powodować mutacje w bakteryjnym DNA, co wskazuje na potencjalną rakotwórczość u ludzi.

Znaczenie testu Ames dla N - Nitrozamin

N - Nitrozoaminy są znane ze swoich właściwości genotoksycznych i rakotwórczych, ponieważ mogą indukować uszkodzenie DNA poprzez alkilację i stres oksydacyjny. Test AMES jest szczególnie przydatny w wykrywaniu ich efektów mutagennych, ponieważ wiele nitrozamin N - wymaga aktywacji metabolicznej poprzez konwersję enzymatyczną, tworząc wysoce reaktywne związki elektrofilowe zdolne do interakcji z DNA. Ta aktywacja zwykle występuje w wątrobie przez enzymy cytochromu P450. Aby powtórzyć tę konwersję metaboliczną in vitro, test jest często przeprowadzany z aktywacją metaboliczną i bez przy użyciu mieszanki S9, preparatem enzymu wątroby pochodzącego z gryzoni, który naśladuje metabolizm ssaków i zwiększa wykrywanie aktywności mutagenowej.

Metodologia testu Ames

Standardowa procedura testu AMES obejmuje następujące kroki:

1. 1. Stosuje się przygotowanie szczepów testowych: Salmonella typhimurium z wstępnymi mutacjami w genach syntezy histydyny. Te szczepy nie mogą rosnąć bez zewnętrznego źródła histydyny, chyba że odwrotna mutacja przywróci funkcję.
2. 2. Ekspozycja na N - nitrozaminy: Hodowla bakteryjna miesza się z badanym związkiem (N - nitrozaminy) na minimalnej płytce agarowej zawierającej niewielką ilość histydyny.
3. 3. Aktywacja metaboliczna (dodanie S9 mieszanki): Aby uwzględnić konwersję metaboliczną w ludzkim ciele, niektóre próbki testowe obejmują frakcję S9, ekstrakt enzymatyczny z mikrosomów wątroby szczura.
4. 4. Inkubacja i wzrost: płytki inkubuje się w 37 ° C przez 48 godzin, umożliwiając wzrost kolonii bakteryjnych, jeśli wystąpią mutacje, które przywracają syntezę histydyny.
5. 5. Liczenie i analiza kolonii: liczba kolonii powracających (bakterie, które odzyskają zdolność do wytwarzania histydyny) i porównuje się do płyt kontrolnych.
6. Interpretacja wyników

• Pozytywny test AMES: znaczący wzrost kolonii powracających w porównaniu z kontrolą sugeruje, że związek indukuje mutacje, co oznacza mutagenne i potencjalnie rakotwórcze właściwości.
• Test ujemny AME: Jeśli nie zaobserwuje się znaczącego wzrostu, związek prawdopodobnie nie jest mutagenny w warunkach testowych.
• Związek dawki - Odpowiedź: Wyższe dawki prowadzące do zwiększonego wskaźnika mutacji wzmacniają dowody mutagenności.

Wniosek

Test AMES jest szybką i opłacalną metodą oceny mutagenności N - nitrozamin. Biorąc pod uwagę ich związek z rakiem, identyfikacja ich właściwości mutagennych za pomocą tego testu ma kluczowe znaczenie dla kontroli regulacyjnej i oceny ryzyka. Test ten pozostaje kamieniem węgielnym w badaniu toksykologicznym i ocenie bezpieczeństwa chemicznego.

Słowa kluczowe: N - Nidozaminy, NDSRIS, OECD 471, Enhanced AME Test, Chomika Wątroba S9, enzymy cytochromu P450, test mutacji