Введение в тест Эймса
Тест Ames, также известный как тест на обратную мутацию бактерий, широко используется для биологического анализа, который оценивает мутагенный потенциал химических соединений, включая N - Нитрозамины. Разработанный доктором Брюсом Эймсом в 1970 -х годах, этот тест использует специфические штаммы бактерии сальмонелла тифимурия, которые несут мутации в генах, участвующих в синтезе гистидина. Тест определяет, может ли вещество вызывать мутации в бактериальной ДНК, что дает представление о потенциальной канцерогенности у людей.
Актуальность теста Эймса для N - Нитрозаминов
N - Нитрозамины известны своими генотоксическими и канцерогенными свойствами, поскольку они могут индуцировать повреждение ДНК посредством алкилирования и окислительного стресса. Тест AMES особенно полезен при обнаружении их мутагенных эффектов, так как многие N - Нитрозамины требуют метаболической активации посредством ферментативного преобразования, образуя высоко реактивные электрофильные промежуточные соединения, способные взаимодействовать с ДНК. Эта активация обычно встречается в печени через ферменты цитохрома P450. Чтобы воспроизвести эту метаболическую конверцию in vitro, тест часто проводится с метаболической активацией и без него с использованием S9 Mix, препарат фермента печени, полученный из грызунов, который имитирует метаболизм млекопитающих и усиливает обнаружение мутагенной активности.
Методология теста Эймса
Стандартная процедура теста Ames включает в себя следующие шаги:
- 1. Приготовление тестовых штаммов: используются штаммы сальмонеллы тайфимурия с предварительными мутациями в генах синтеза гистидина. Эти штаммы не могут расти без внешнего источника гистидина, если только обратная мутация не восстанавливает функцию.
- 2. Воздействие N - Нитрозамины: бактериальная культура смешивается с испытательным соединением (N - Нитрозамин) на минимальной агаровой пластине, содержащей небольшое количество гистидина.
- 3. Метаболическая активация (добавление смеси S9): Чтобы учесть метаболическую конверсию в организме человека, некоторые испытательные образцы включают фракцию S9, ферментативный экстракт из микросомов печени крысы.
- 4. Инкубация и рост: пластины инкубируются при 37 ° C в течение 48 часов, что позволяет бактериальным колониям расти, если возникают мутации, которые восстанавливают синтез гистидина.
- 5. Подсчет и анализ колоний: количество ревертирующих колоний (бактерии, которые восстановили способность продуцировать гистидин), подсчитывается и сравнивается с контрольными пластинами.
- Интерпретация результатов
- Положительный тест Эймса: значительное увеличение ревертативных колоний по сравнению с контролем предполагает, что соединение индуцирует мутации, подразумевая мутагенные и потенциально канцерогенные свойства.
- Отрицательный тест Ames: если не наблюдается значительного увеличения, соединение, вероятно, не является мутагеновым в условиях испытаний.
- Доза - Отношение ответа: более высокие дозы, приводящие к увеличению скорости мутации, укрепляют доказательства мутагенности.
Заключение
Тест Эймса является быстрым и стоимостью - Эффективный метод оценки мутагенности N - Нитрозаминов. Учитывая их связь с раком, выявление их мутагенных свойств с помощью этого анализа имеет решающее значение для регуляторного контроля и оценки риска. Этот тест остается краеугольным камнем в токсикологическом скрининге и оценке химической безопасности.
Ключевые слова: N - Нитрозамины, NDSRIS, OECD 471, Enhanced Ames Test, печень Hamster S9, ферменты цитохрома P450, тест на мутации
Время публикации: 2025 - 03 - 11 09:16:10