AMES Test pre n - nitrozamíny: Hodnotenie mutagénnosti

Úvod do testu AMES

Test AMES, známy tiež ako test bakteriálnej reverznej mutácie, je široko používaný na biologický test, ktorý hodnotí mutagénny potenciál chemických zlúčenín vrátane n - nitrozamínov. Tento test, ktorý vyvinul Dr. Bruce Ames v 70. rokoch 20. storočia, využíva špecifické kmene baktérie Salmonella Typhimurium, ktoré nesú mutácie v génoch zapojených do syntézy histidínu. Test určuje, či látka môže spôsobiť mutácie v bakteriálnej DNA, čo naznačuje indikáciu potenciálnej karcinogénnosti u ľudí.

Relevantnosť testu AMES pre n - nitrosamíny

N - nitrozamíny sú známe svojimi genotoxickými a karcinogénnymi vlastnosťami, pretože môžu indukujú poškodenie DNA alkyláciou a oxidačným stresom. Test AMES je obzvlášť užitočný pri detekcii ich mutagénnych účinkov, pretože mnoho n - nitrozamínov vyžaduje metabolickú aktiváciu prostredníctvom enzymatickej konverzie za vzniku vysoko reaktívnych elektrofilných medziproduktov schopných interagovať s DNA. Táto aktivácia sa zvyčajne vyskytuje v pečeni prostredníctvom enzýmov cytochrómu P450. Na replikáciu tejto metabolickej konverzie in vitro sa test často vykonáva s metabolickou aktiváciou a bez neho pomocou S9 Mixu, prípravky pečeňových enzýmov odvodených od hlodavcov, ktorý napodobňuje metabolizmus cicavcov a zvyšuje detekciu mutagénnej aktivity.

Metodika testu AMES

Štandardný postup testu AMES zahŕňa nasledujúce kroky:

1. 1. Príprava testovacích kmeňov: Používajú sa kmene Salmonella Typhimurium s predchádzajúcimi mutáciami v génoch syntézy histidínu. Tieto kmene nemôžu rásť bez externého zdroja histidínu, pokiaľ reverzná mutácia neobsahuje funkciu.
2. 2. Vystavenie n - nitrosamínov: bakteriálna kultúra sa zmieša s testovacou zlúčeninou (N - nitrozamín) na minimálnej agarovej doštičke obsahujúcej malé množstvo histidínu.
3. 3. Metabolická aktivácia (pridanie mixu S9): Aby sa zohľadnila metabolická konverzia v ľudskom tele, niektoré testovacie vzorky zahŕňajú frakciu S9, enzymatický extrakt z mikrozómov pečene potkanov.
4. 4. Inkubácia a rast: Doštičky sa inkubujú pri 37 ° C počas 48 hodín, čo umožňuje rásť bakteriálnych kolónií, ak sa vyskytnú mutácie, ktoré obnovujú syntézu histidínu.
5. 5. Počítanie a analýza kolónií: Počet kratových kolónií (baktérie, ktoré znovu získali schopnosť produkovať histidín), sa počíta a porovnáva s kontrolnými doskami.
6. Interpretácia výsledkov

• Pozitívny test AMES: Významné zvýšenie revertantných kolónií v porovnaní s kontrolou naznačuje, že zlúčenina indukuje mutácie, čo naznačuje mutagénne a potenciálne karcinogénne vlastnosti.
• Negatívny test AME: Ak sa nepozoruje žiadne významné zvýšenie, zlúčenina je pravdepodobne ne - mutagenická za testovacích podmienok.
• Dávka odozvy Vzťah odozvy: Vyššie dávky, ktoré vedú k zvýšeniu miery mutácie, posilňujú dôkazy mutagenity.

Záver

Test AMES je rýchla a nákladová účinná metóda na hodnotenie mutagénnosti N - nitrosamínov. Vzhľadom na ich spojenie s rakovinou je identifikácia ich mutagénnych vlastností prostredníctvom tohto testu rozhodujúca pre regulačnú kontrolu a hodnotenie rizika. Tento test zostáva základným kameňom v toxikologickom skríningu a hodnotení chemickej bezpečnosti.

Kľúčové slová: N - nitrosamíny, NDSRIS, OECD 471, Enhanced AMES Test, Enzýmy Cytochrómu p450, test mutačného testu