Hyrje në Testin e Ames
Testi AMES, i njohur gjithashtu si testi i mutacionit të kundërt bakterial është i përdorur gjerësisht për analizën biologjike që vlerëson potencialin mutagjenik të komponimeve kimike, përfshirë n - nitrosamines. Zhvilluar nga Dr. Bruce Ames në vitet 1970, ky test përdor sojet specifike të bakterit Salmonella typhimurium që mbajnë mutacione në gjenet e përfshira në sintezën e histidinës. Testi përcakton nëse një substancë mund të shkaktojë mutacione në ADN -në bakteriale, duke siguruar një tregues të kancerogjenitetit të mundshëm te njerëzit.
Rëndësia e testit Ames për n - nitrosamines
N - nitrosaminat janë të njohura për vetitë e tyre gjenotoksike dhe kancerogjene, pasi ato mund të shkaktojnë dëmtim të ADN -së përmes alkilimit dhe stresit oksidativ. Testi AMES është veçanërisht i dobishëm në zbulimin e efekteve të tyre mutagjene, pasi shumë n - nitrosamina kërkojnë aktivizim metabolik përmes konvertimit enzimatik për të formuar ndërmjetës elektrofilikë shumë reaktivë të aftë për të bashkëvepruar me ADN -në. Ky aktivizim zakonisht ndodh në mëlçi përmes enzimave të citokromit P450. Për të përsëritur këtë konvertim metabolik in vitro, testi shpesh bëhet me dhe pa aktivizim metabolik duke përdorur miksin S9, një përgatitje të enzimës së mëlçisë që rrjedh nga brejtësit, i cili imiton metabolizmin e gjitarëve dhe rrit zbulimin e aktivitetit mutagjenik.
Metodologjia e testit Ames
Procedura standarde e testit AMES përfshin hapat e mëposhtëm:
- 1. Përgatitja e shtameve të provës: Përdoren shtame Salmonella typhimurium me para - mutacione ekzistuese në gjenet e sintezës histidine. Këto shtame nuk mund të rriten pa një burim të jashtëm histidine, përveç nëse një mutacion i kundërt rikthen funksionin.
- 2. Ekspozimi ndaj n - nitrosamines: Kultura bakteriale është e përzier me përbërjen e provës (n - nitrosamine) në një pllakë minimale agar që përmban një sasi të vogël të histidinës.
- 3. Aktivizimi metabolik (Shtesa e përzierjes S9): Për të llogaritur shndërrimin metabolik në trupin e njeriut, disa mostra provë përfshijnë fraksionin S9, një ekstrakt enzimatik nga mikrosomat e mëlçisë së miut.
- 4. Inkubacioni dhe rritja: Pllaka inkubohet në 37 ° C për 48 orë, duke lejuar kolonitë bakteriale të rriten nëse ndodhin mutacione që rivendosin sintezën e histidinës.
- 5. Numërimi dhe analiza e kolonisë: Numri i kolonive të kthyera (bakteret që rimarrin aftësinë për të prodhuar histidinë) llogaritet dhe krahasohet me pllakat e kontrollit.
- Interpretimi i rezultateve
- Testi pozitiv i AME: Një rritje e konsiderueshme në kolonitë e kthyeshme në krahasim me kontrollin sugjeron që kompleksi shkakton mutacione, duke nënkuptuar veti mutagjenike dhe potencialisht kancerogjene.
- Testi negativ i Ames: Nëse nuk vërehet një rritje e konsiderueshme, përbërja ka të ngjarë jo - mutagjene në kushtet e provës.
- Doza - Marrëdhënia e përgjigjes: Doza më të larta që çojnë në rritje të niveleve të mutacionit forcojnë provat e mutagjenitetit.
Përfundim
Testi Ames është një metodë e shpejtë dhe me kosto - efektive për vlerësimin e mutagjenitetit të n - nitrosamines. Duke pasur parasysh shoqërimin e tyre me kancerin, identifikimi i vetive të tyre mutagjene përmes kësaj analize është thelbësore për kontrollin rregullator dhe vlerësimin e rrezikut. Ky test mbetet një gur themeli në shqyrtimin toksikologjik dhe vlerësimin e sigurisë kimike.
Fjalë kyçe: N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, Testi i Zgjeruar AMES, Hamster Mëlçia S9, Enzimat e Citokromit P450, Testi i Mutacionit
Koha e postimit: 2025 - 03 - 11 09:16:10