АМЕС тест за Н - Нитрозамине: Процена мутагености

Увод у АМЕС тест

Тест АМЕС-а, познат и као бактеријски тест за реверзну мутацију широко се користи за биолошку тесту која процењује мутагени потенцијал хемијских једињења, укључујући Н - нитрозамине. Развио је Др Бруце Амес 1970-их, овај тест користи специфичне сојеве бактерије салмонеле китхимурима који носе мутације у генима који су укључени у хистидинску синтезу. Тест одређује да ли супстанца може изазвати мутације у бактеријском ДНК, пружајући индикацију потенцијалне канцерогености код људи.

Релевантност АМЕС теста за Н - Нитрозамине

Н - Нитрозамини су познати по својим генотоксичним и карциногеним својствима, јер могу да индукују оштећење ДНК алкилацијом и оксидативним стресом. АМЕС тест је посебно користан у откривању њихових мутагених ефеката, што више Н - нитрозамина захтева метаболичку активирање путем ензимске конверзије да би формирао високо реактивни електрофилни интермедијари који могу да комуницирају са ДНК-ом. Ова активација се обично јавља у јетри кроз цитохроме П450 ензими. Да бисте поновили ову метаболичку конверзију ин витро, тест се често врши са и без метаболичке активирања користећи С9 Мик, припрема јетрене ензима добијене од глодара, који опонашају метаболизам сисара и побољшава детекцију мутагене активности.

Методологија теста АМЕС

Стандардни поступак АМЕС теста укључује следеће кораке:

1. 1. Припрема тестних сојева: Користе се сојеви са салмонелом са предностима постојећих мутација у хистидинским синтезима. Ови сојеви не могу да расту без спољног хистидинског извора уколико не обнавља функцију обрнутог мутације.
2. 2 Изложеност Н - Нитрозаминима: Бактеријска култура се меша са тестним једињењем (Н - нитросамин) на минималној агарној плочи која садржи малу количину хистидина.
3. 3. Метаболичка активација (С9 Мик Аддиал): Да бисте назрачили метаболичку конверзију у људском телу, неки узори за тестирање укључују С9 фракцију, ензимски екстракт од микросома јетре пацова.
4. 4. Инкубација и раст: плоче се инкубирају на 37 ° Ц током 48 сати, што омогућава раст бактеријских колонија ако се мутације појаве у томе да обнављају хистидински синтезу.
5. 5. Бројање и анализа колоније: Број умањених колонија (бактерије које су повратили способност стварања хистидина) се рачуна и у поређењу са контролним тањирима.
6. Тумачење резултата

• Позитивни тест АМЕС-а: значајно повећање умањених колонија у поређењу са контролом сугерира да једињење индукује мутације, подразумевају мутагену и потенцијално канцерогену својства.
• Негативни тест АМЕС: Ако се не примети значајан пораст, једињење је вероватно нетагено у условима испитивања.
• Однос дозе - Одговор: Веће дозе које воде до повећане стопе мутације ојачају доказе о мутагености.

Закључак

АМЕС тест је брза и коштана - ефикасна метода за процену мутагености Н - Нитрозамина. С обзиром на њихову повезаност са раком, идентификовањем њихових мутагених својстава кроз овај тест је пресудан за регулаторну контролу и процену ризика. Овај тест остаје камен темељац у токсиколошкој скрининг и хемијској безбедности.

Кључне речи: н - нитрозамине, НДСРИС, ОЕЦД 471, побољшани АМЕС тест, јетра хрчка С9, цитохроме П450 Ензими, тест мутације