Ames Testine Giriş
Bakteriyel ters mutasyon testi olarak da bilinen Ames testi, N - nitrosaminler dahil kimyasal bileşiklerin mutajenik potansiyelini değerlendiren biyolojik tahlil için yaygın olarak kullanılan birdir. 1970'lerde Dr. Bruce Ames tarafından geliştirilen bu test, histidin sentezinde yer alan genlerde mutasyonları taşıyan Salmonella typhimurium bakterisinin spesifik suşlarını kullanır. Test, bir maddenin bakteriyel DNA'da mutasyonlara neden olup olamayacağını belirler ve insanlarda potansiyel kanserojenitenin bir göstergesidir.
N - nitrosamines için Ames testinin alaka düzeyi
N - nitrozaminler genotoksik ve kanserojen özellikleri ile bilinir, çünkü alkilasyon ve oksidatif stres yoluyla DNA hasarını indükleyebilirler. Ames testi, mutajenik etkilerinin tespitinde özellikle yararlıdır, çünkü birçok N - nitrozamin, DNA ile etkileşime girebilen yüksek reaktif elektrofilik ara maddeler oluşturmak için enzimatik dönüşüm yoluyla metabolik aktivasyon gerektirir. Bu aktivasyon tipik olarak karaciğerde sitokrom P450 enzimleri yoluyla meydana gelir. Bu metabolik dönüşümü in vitro olarak çoğaltmak için, test genellikle memeli metabolizmasını taklit eden ve mutajenik aktivitenin saptanmasını arttıran kemirgenlerden türetilmiş bir karaciğer enzim preparatı olan S9 karışımı kullanılarak metabolik aktivasyon ile ve olmadan gerçekleştirilir.
Ames testinin metodolojisi
Ames testinin standart prosedürü aşağıdaki adımları içerir:
- 1. Test suşlarının hazırlanması: Histidin sentez genlerinde mevcut mutasyonlar olan Salmonella typhimuryum suşları kullanılır. Ters bir mutasyon işlevini geri yüklemedikçe, bu suşlar harici bir histidin kaynağı olmadan büyüyemez.
- 2. N - nitrosaminlere maruz kalma: Bakteriyel kültür, az miktarda histidin içeren minimal bir agar plakası üzerinde test bileşiği (N - nitrosamin) ile karıştırılır.
- 3. Metabolik aktivasyon (S9 karışımı ilavesi): İnsan vücudundaki metabolik dönüşümü hesaba katmak için bazı test örnekleri arasında sıçan karaciğer mikrozomlarından enzimatik bir ekstrakt olan S9 fraksiyonu bulunur.
- 4. İnkübasyon ve Büyüme: Plakalar, 37 ° C'de 48 saat süreyle inkübe edilir ve histidin sentezini geri kazandıran mutasyonlar meydana gelirse bakteriyel kolonilerin büyümesine izin verir.
- 5. Koloni sayımı ve analizi: Revefaster kolonilerin sayısı (histidin üretme yeteneğini yeniden kazanan bakteriler) sayılır ve kontrol plakalarıyla karşılaştırılır.
- Sonuçların yorumlanması
- Pozitif AMES testi: Revefaster kolonilerindeki kontrole kıyasla önemli bir artış, bileşiğin mutajenik ve potansiyel olarak kanserojen özellikleri ima ederek mutasyonları indüklediğini düşündürmektedir.
- Negatif AMES testi: Önemli bir artış gözlenmezse, bileşik muhtemelen test koşulları altında - mutajenik değildir.
- Doz - Yanıt ilişkisi: Mutasyon oranlarının artmasına neden olan daha yüksek dozlar mutajenisite kanıtlarını güçlendirir.
Çözüm
Ames testi, N - nitrosaminlerin mutajenisitesini değerlendirmek için hızlı ve maliyet - etkili bir yöntemdir. Kanserle ilişkileri göz önüne alındığında, bu tahlil yoluyla mutajenik özelliklerinin tanımlanması, düzenleyici kontrol ve risk değerlendirmesi için çok önemlidir. Bu test toksikolojik tarama ve kimyasal güvenlik değerlendirmesinde bir temel taşı olmaya devam etmektedir.
Anahtar Kelimeler: N - nitrosaminler, NDSRIS, OECD 471, Geliştirilmiş Ames Testi, Hamster Karaciğer S9, Sitokrom P450 Enzimler, Mutasyon Testi
Gönderme Zamanı: 2025 - 03 - 11 09:16:10