اختبار Ames لـ N - nitrosamines: تقييم الطفرات

مقدمة لاختبار AMES

اختبار AMES ، المعروف أيضًا باسم اختبار الطفرة العكسي البكتيرية يستخدم على نطاق واسع في الفحص البيولوجي الذي يقيم الإمكانات الطفرة للمركبات الكيميائية ، بما في ذلك n - nitrosamines. يستخدم هذا الاختبار من قبل الدكتور بروس آميس في سبعينيات القرن العشرين ، ويستخدم سلالات محددة من البكتيريا السالمونيلا التيفيموريوم التي تحمل طفرات في الجينات المشاركة في تخليق الهستيدين. يحدد الاختبار ما إذا كانت المادة يمكن أن تسبب طفرات في الحمض النووي البكتيري ، مما يوفر مؤشرا على التسرطن المحتملة لدى البشر.

أهمية اختبار AMES لـ N - nitrosamines

تشتهر N - بالنيتروسامينات بخصائصها السامة والسرطان ، حيث يمكن أن تحفز تلف الحمض النووي من خلال الألكلة والإجهاد التأكسدي. يعد اختبار AMES مفيدًا بشكل خاص في اكتشاف آثارها الطفرة ، حيث يتطلب العديد من النيتروسامينات N - تنشيط التمثيل الغذائي عن طريق التحويل الأنزيمي لتشكيل وسيط كهربائي للغاية قادر على التفاعل مع الحمض النووي. يحدث هذا التنشيط عادة في الكبد من خلال إنزيمات السيتوكروم P450. لتكرار هذا التحويل الأيضي في المختبر ، غالبًا ما يتم إجراء الاختبار مع وبدون تنشيط التمثيل الغذائي باستخدام مزيج S9 ، وهو إعداد إنزيم الكبد مشتق من القوارض ، والذي يحاكي استقلاب الثدييات ويعزز اكتشاف النشاط الطفري.

منهجية اختبار AMES

يتضمن الإجراء القياسي لاختبار AMES الخطوات التالية:

1. 1. إعداد سلالات الاختبار: يتم استخدام سلالات سالمونيلا التيفيموريوم مع الطفرات الحالية في جينات تخليق الهستيدين. لا يمكن أن تنمو هذه السلالات بدون مصدر هستيدين خارجي ما لم تعيد الطفرة العكسية وظيفة.
2. 2. التعرض للنيتروسامينات: يتم خلط الثقافة البكتيرية مع مركب الاختبار (n - nitrosamine) على لوحة أجار الحد الأدنى التي تحتوي على كمية صغيرة من الهستيدين.
3. 3. تنشيط التمثيل الغذائي (إضافة مزيج S9): لحساب التحويل الأيضي في جسم الإنسان ، تشمل بعض عينات الاختبار جزء S9 ، مستخلص إنزيمي من microsomes الكبد الفئران.
4. 4. الحضانة والنمو: يتم تحضين اللوحات عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة ، مما يسمح للمستعمرات البكتيرية بالنمو في حالة حدوث طفرات تستعيد تخليق الهستيدين.
5. 5. عد المستعمرة وتحليلها: يتم حساب عدد المستعمرات العادلة (البكتيريا التي استعادت القدرة في إنتاج الهستيدين) ومقارنتها بألواح التحكم.
6. تفسير النتائج

• اختبار AMES الإيجابي: زيادة كبيرة في المستعمرات العازلة مقارنةً بالتحكم تشير إلى أن المركب يستحث طفرات ، مما يعني ضمناً خصائص الطفرات والسرطان.
• اختبار AMES السلبي: إذا لم يلاحظ أي زيادة كبيرة ، فمن المحتمل أن يكون المركب غير Mutagenic في ظل ظروف الاختبار.
• الجرعة - علاقة الاستجابة: جرعات أعلى مما يؤدي إلى زيادة معدلات الطفرة تعزز دليل الطفرات.

خاتمة

اختبار AMES هو طريقة سريعة وتكلفة - فعالة لتقييم طفرات n - nitrosamines. بالنظر إلى ارتباطهم بالسرطان ، يعد تحديد خصائص الطفرات من خلال هذا الفحص أمرًا بالغ الأهمية للمراقبة التنظيمية وتقييم المخاطر. لا يزال هذا الاختبار حجر الزاوية في الفحص السمي وتقييم السلامة الكيميائية.

الكلمات المفتاحية: N - النيتروسامينات ، NDSRIS ، OECD 471 ، اختبار AMES المحسن ، كبد الهامستر S9 ، cytochrome p450 ، اختبار الطفرة