Ames teszt n - nitrozaminok: A mutagenitás értékelése

Bevezetés az Ames tesztbe

Az Ames -teszt, más néven bakteriális fordított mutációs teszt, egy széles körben alkalmazott biológiai vizsgálathoz, amely kiértékeli a kémiai vegyületek, beleértve az n - nitrozaminokat is. Dr. Bruce Ames által az 1970 -es években fejlesztette ki, ez a teszt a Salmonella typhimurium baktérium -specifikus törzseit használja, amelyek mutációkat hordoznak a hisztidin szintézisben részt vevő génekben. A teszt meghatározza, hogy egy anyag mutációkat okozhat -e a bakteriális DNS -ben, jelezve az emberek potenciális karcinogenitását.

Az AMES teszt relevanciája n - nitrozaminok esetén

N - A nitrozaminok genotoxikus és karcinogén tulajdonságaikról ismertek, mivel alkilezés és oxidatív stressz révén okozhatják a DNS -károsodást. Az Ames -teszt különösen hasznos mutagén hatásaik kimutatására, mivel sok N - nitrozamin megköveteli az enzimatikus átalakuláson keresztüli metabolikus aktiválást, hogy erősen reaktív elektrofil intermedierek képződjenek, amelyek képesek kölcsönhatásba lépni a DNS -sel. Ez az aktiválás általában a májban citokróm P450 enzimek révén fordul elő. A metabolikus átalakulás in vitro megismételése érdekében a tesztet gyakran metabolikus aktiválással és anélkül végzik az S9 Mix alkalmazásával, a rágcsálókból származó máj enzimkészítéssel, amely utánozza az emlős anyagcserét és javítja a mutagén aktivitás kimutatását.

Az Ames -teszt módszertana

Az AMES teszt standard eljárása a következő lépéseket foglalja magában:

1. 1. A teszt törzsek előállítása: Salmonella typhimurium törzseket pre - meglévő mutációkkal használunk a hisztidin -szintézis génekben. Ezek a törzsek nem növekedhetnek külső hisztidin forrás nélkül, ha a fordított mutáció visszaállítja a funkciót.
2. 2. N - nitrozaminok expozíciója: A baktériumtenyésztést összekeverik a tesztvegyzővel (N - nitrozamin) egy minimális agarlemezen, amely kis mennyiségű hisztidint tartalmaz.
3. 3. Metabolikus aktiválás (S9 keverék kiegészítése): Az emberi test anyagcsere -átalakulásának figyelembevétele érdekében néhány tesztminta közé tartozik az S9 frakció, a patkánymáj mikroszómáinak enzimatikus extraktuma.
4. 4. Inkubálás és növekedés: A lemezeket 37 ° C -on 48 órán át inkubálják, lehetővé téve a baktériumkolónák növekedését, ha mutációk fordulnak elő, amelyek helyreállítják a hisztidin szintézist.
5. 5. A kolóniaszámlálás és az elemzés: Megszámolják a revertáns kolóniák (baktériumok, amelyek visszanyerték a hisztidin előállítását) számát, és összehasonlítják a kontroll lemezekkel.
6. Az eredmények értelmezése

• Pozitív Ames -teszt: A revertáns kolóniák szignifikáns növekedése a kontrollhoz képest arra utal, hogy a vegyület mutációkat indukál, mutagén és potenciálisan karcinogén tulajdonságokat jelent.
• Negatív AMES -teszt: Ha nem figyelnek meg szignifikáns növekedést, akkor a vegyület valószínűleg nem - mutagén teszt körülmények között.
• Dózis - Válasz kapcsolat: A magasabb dózisok, amelyek megnövekedett mutációs sebességhez vezetnek, erősítik a mutagenitás bizonyítékait.

Következtetés

Az Ames -teszt gyors és költség - hatékony módszer az N - nitrozaminok mutagenitásának értékelésére. Tekintettel a rákkal való kapcsolataikra, a mutagén tulajdonságaik azonosítása ezen a vizsgán keresztül döntő jelentőségű a szabályozási ellenőrzéshez és a kockázatértékeléshez. Ez a teszt továbbra is a toxikológiai szűrés és a kémiai biztonsági értékelés sarokköve marad.

Kulcsszavak: N - nitrozaminok, NDSRIS, OECD 471, továbbfejlesztett Ames -teszt, hörcsög máj S9, citokróm P450 enzimek, mutációs teszt