Įvadas į Ames testą
Ames testas, dar žinomas kaip bakterijų atvirkštinės mutacijos testas, yra plačiai naudojamas biologiniam tyrimui, kuris įvertina cheminių junginių mutageninį potencialą, įskaitant n - nitrozaminus. Sukurtas dr. Bruce'as Amesas aštuntajame dešimtmetyje, šiame teste naudojamos specifinės bakterijos Salmonella typhimurium padermių, kurios sukelia histidino sintezės genų mutacijas. Tyrimas nustato, ar medžiaga gali sukelti bakterijų DNR mutacijas, parodant galimą kancerogeniškumą žmonėms.
AMES testo aktualumas n - nitrozaminams
N - nitrozaminai yra žinomi dėl savo genotoksinių ir kancerogeninių savybių, nes jie gali sukelti DNR pažeidimą per alkilinimą ir oksidacinį stresą. AMES testas yra ypač naudingas nustatant jų mutageninį poveikį, nes daugeliui n - nitrozaminų reikia aktyvuoti metabolinį aktyvaciją fermentiniu konversijomis, kad susidarytų labai reaktyvūs elektrofiliniai tarpiniai produktai, galintys sąveikauti su DNR. Paprastai šis aktyvinimas kepenyse vyksta per citochromo P450 fermentus. Norėdami atkartoti šį metabolinį virsmą in vitro, bandymas dažnai atliekamas su metaboliniu aktyvacija ir be jo, naudojant S9 mišinį - kepenų fermentą, gautą iš graužikų, kuris imituoja žinduolių metabolizmą ir sustiprina mutageninio aktyvumo nustatymą.
Ames testo metodika
Standartinė Ames testo procedūra apima šiuos veiksmus:
- 1. Bandymo padermių paruošimas: Salmonella Typhimurium padermės su prieš - esamomis histidino sintezės genų mutacijomis. Šios padermės negali augti be išorinio histidino šaltinio, nebent atvirkštinė mutacija atkuria funkciją.
- 2. N - nitrozaminų poveikis: bakterijų kultūra sumaišoma su bandomuoju junginiu (n - nitrozaminu) ant minimalios agaro plokštelės, kurioje yra nedidelis histidino kiekis.
- 3. Metabolinis aktyvinimas (S9 mišinio pridėjimas): siekiant atsižvelgti į metabolinį konversiją žmogaus kūne, kai kuriuose bandomuose mėginiuose yra S9 frakcija, fermentinis ekstraktas iš žiurkių kepenų mikrosomų.
- 4. Inkubacija ir augimas: Plokštės 48 valandas inkubuojamos 37 ° C temperatūroje, leidžiančios augti bakterinėms kolonijoms, jei įvyksta mutacijos, atkuriančios histidino sintezę.
- 5. Kolonijų skaičiavimas ir analizė: Grįžtančių kolonijų (bakterijų, kurios atgavo gebėjimą gaminti histidiną) skaičius yra skaičiuojamas ir lyginamas su kontrolinėmis plokštelėmis.
- Rezultatų aiškinimas
- Teigiamas AMES testas: Reikšmingai padidėjęs revertantų kolonijų padidėjimas, palyginti su kontrole, rodo, kad junginys sukelia mutacijas, reiškiančias mutagenines ir potencialiai kancerogenines savybes.
- Neigiamas Ames testas: Jei reikšmingo padidėjimo nepastebėta, bandymo sąlygomis junginys greičiausiai nėra mutageninis.
- Dozė - Atsakymo santykis: didesnės dozės, dėl kurių padidėja mutacijų dažnis, sustiprina mutageniškumo įrodymus.
Išvada
„Ames“ testas yra greitas ir kainuojantis - efektyvus metodas Nitrozaminų mutageniškumui įvertinti. Atsižvelgiant į jų ryšį su vėžiu, atliekant šį tyrimą, labai svarbu nustatyti jų mutagenines savybes atliekant reguliavimo kontrolę ir rizikos vertinimą. Šis testas išlieka kertinis toksikologinio patikrinimo ir cheminio saugos įvertinimo akmuo.
Raktažodžiai: n - nitrozaminai, NDSris, OECD 471, patobulintas Ames testas, žiurkėno kepenų S9, citochromo P450 fermentai, mutacijos bandymas
Skelbimo laikas: 2025 - 03 - 11 09:16:10