Inleiding tot de AMES -test
De AMES -test, ook bekend als bacteriële reverse mutatietest is een veelgebruikte voor biologische test die het mutagene potentieel van chemische verbindingen evalueert, waaronder n - nitrosamines. Ontwikkeld door Dr. Bruce Ames in de jaren zeventig, maakt deze test gebruik van specifieke stammen van het bacterie Salmonella typhimurium die mutaties dragen in genen die betrokken zijn bij histidinesynthese. De test bepaalt of een stof mutaties in bacterieel DNA kan veroorzaken, waardoor een indicatie is van potentiële carcinogeniteit bij mensen.
Relevantie van de AMES -test voor n - nitrosamines
N - nitrosamines staan bekend om hun genotoxische en carcinogene eigenschappen, omdat ze DNA -schade kunnen induceren door alkylering en oxidatieve stress. De AMES -test is met name nuttig bij het detecteren van hun mutagene effecten, omdat veel N - nitrosaminen metabole activering vereisen via enzymatische conversie om zeer reactieve elektrofiele tussenproducten te vormen die in staat zijn om te interageren met DNA. Deze activering komt meestal voor in de lever via cytochroom P450 -enzymen. Om deze metabole conversie in vitro te repliceren, wordt de test vaak uitgevoerd met en zonder metabole activering met behulp van S9 -mix, een leveren van leverenzym afgeleid van knaagdieren, die het metabolisme van zoogdieren nabootst en de detectie van mutagene activiteit verbetert.
Methodologie van de AMES -test
De standaardprocedure van de AMES -test omvat de volgende stappen:
- 1. Bereiding van teststammen: Salmonella typhimurium -stammen met pre - bestaande mutaties in histidine -synthesiegenen worden gebruikt. Deze stammen kunnen niet groeien zonder een externe histidinebron tenzij een omgekeerde mutatie de functie herstelt.
- 2. Blootstelling aan N - nitrosamines: de bacteriekweek wordt gemengd met de testverbinding (N - nitrosamine) op een minimale agarplaat die een kleine hoeveelheid histidine bevat.
- 3. Metabole activering (toevoeging van de S9 -mix): Om rekening te houden met metabole conversie in het menselijk lichaam, omvatten sommige testmonsters S9 -fractie, een enzymatisch extract van levermicrosomen van ratten.
- 4. Incubatie en groei: de platen worden 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd, waardoor bacteriekolonies kunnen groeien als mutaties optreden die histidine -synthese herstellen.
- 5. Kolonie tellen en analyseren: het aantal revertantkolonies (bacteriën die het vermogen om histidine te produceren) wordt teruggekeerd en vergeleken met controleplaten.
- Interpretatie van resultaten
- Positieve AMES -test: een significante toename van kolonies in de kolones in vergelijking met de controle suggereert dat de verbinding mutaties induceert, wat mutagene en mogelijk carcinogene eigenschappen impliceert.
- Negatieve AMES -test: als er geen significante toename wordt waargenomen, is de verbinding waarschijnlijk niet - mutagene onder de testomstandigheden.
- Dosis - Responsrelatie: hogere doses die leiden tot verhoogde mutatiesnelheden versterken het bewijs van mutageniteit.
Conclusie
De AMES -test is een snelle en kosten - effectieve methode voor het beoordelen van de mutageniteit van n - nitrosamines. Gezien hun associatie met kanker, is het identificeren van hun mutagene eigenschappen via deze test cruciaal voor regulerende controle en risicobeoordeling. Deze test blijft een hoeksteen in toxicologische screening en evaluatie van chemische veiligheid.
Sleutelwoorden: N - Nitrosamines, NDSRIS, OESO 471, verbeterde AMES -test, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 Enzymen, Mutation Test
Posttijd: 2025 - 03 - 11 09:16:10