Ames test za n - nitrozamine: ocenjevanje mutagenosti

Uvod v test AMES

Amesov test, znan tudi kot bakterijski test povratne mutacije, se pogosto uporablja za biološki test, ki ocenjuje mutageni potencial kemičnih spojin, vključno z n - nitrozamini. Ta test, ki ga je razvil dr. Bruce Ames v 70. letih prejšnjega stoletja, uporablja specifične seve bakterijske salmonele tifimurija, ki nosijo mutacije v genih, ki sodelujejo pri sintezi histidina. Test določa, ali lahko snov povzroči mutacije v bakterijski DNK, kar kaže na potencialno rakotvornost pri ljudeh.

Ustreznost testa Ames za n - nitrozamine

N - nitrozamini so znani po svojih genotoksičnih in rakotvornih lastnostih, saj lahko povzročijo poškodbe DNK z alkilacijo in oksidativnim stresom. Amesov test je še posebej uporaben pri odkrivanju njihovih mutagenih učinkov, saj mnogi n - nitrozamini potrebujejo presnovno aktivacijo z encimsko pretvorbo, da tvorijo visoko reaktivne elektrofilne intermediate, ki so sposobni interakcije z DNK. Ta aktivacija se običajno pojavi v jetrih prek encimov citokroma P450. Za ponovitev te presnovne pretvorbe in vitro se test pogosto izvaja z in brez presnovne aktivacije z uporabo S9 mešanice, pripravka jetrnega encima, ki izhaja iz glodalcev, ki posnema presnovo sesalcev in poveča odkrivanje mutagene aktivnosti.

Metodologija testa AMES

Standardni postopek testa AMES vključuje naslednje korake:

1. 1. Priprava preskusnih sevov: Salmonella tifimurium sevi s pred - obstoječimi mutacijami v genih sinteze histidina se uporabljajo. Ti sevi ne morejo rasti brez zunanjega vira histidina, razen če reverzna mutacija ne deluje.
2. 2. Izpostavljenost N - nitrozamina: Bakterijska kultura se meša s preskusno spojino (n - nitrozamin) na minimalni agar plošči, ki vsebuje majhno količino histidina.
3. 3. Presnovna aktivacija (dodatek S9 Mix): Če želite upoštevati presnovno pretvorbo v človeškem telesu, nekateri preskusni vzorci vključujejo S9 frakcijo, encimski ekstrakt iz mikrosomov jeter podgane.
4. 4. Inkubacija in rast: plošče se 48 ur inkubirajo pri 37 ° C, kar omogoča rasti bakterijskih kolonij, če se pojavijo mutacije, ki obnavljajo sintezo histidina.
5. 5. Štetje in analiza kolonije: Število revertantnih kolonij (bakterije, ki so ponovno pridobile sposobnost proizvodnje histidina), se šteje in primerja s kontrolnimi ploščami.
6. Interpretacija rezultatov

• Pozitiven AMES test: znatno povečanje revertantnih kolonij v primerjavi s kontrolo kaže, da spojina povzroči mutacije, kar pomeni mutagene in potencialno rakotvorne lastnosti.
• Negativni AMES test: Če ni opaziti pomembnega povečanja, spojina verjetno ni - mutagena v preskusnih pogojih.
• Odmerek - Odzivni odnos: Večji odmerki, ki vodijo do povečane stopnje mutacije, krepijo dokaze o mutagenosti.

Zaključek

Amesov test je hitra in strošek - učinkovita metoda za oceno mutagenosti n - nitrozaminov. Glede na njihovo povezanost z rakom je prepoznavanje njihovih mutagenih lastnosti s tem testom ključnega pomena za regulativno nadzor in oceno tveganja. Ta test ostaja temelj pri ocenjevanju toksikološkega presejanja in kemične varnosti.

Ključne besede: N - nitrosamini, NDSRIS, OECD 471, Enhanced Ames test, hrčka jeter S9, encimi citokroma P450, mutacijski test