Aangesien die geneesmiddelmetaboliserende ensiemaktiwiteite geleidelik afneem met die verlenging van in vitro-inkubasietyd, het tradisionele in vitro-metabolismemodelle beperkings soos kort inkubasietyd, lae metaboliese omskakeling en hoë onderste limiet van opsporing (die kwantitatiewe onderste limiet van CLint-toets is 2,5 μL /(min·106 selle)), wat nie akkuraat voorspel kan word vir stadige gemetaboliseerde middels nie.[1]. Intussen,hepatosiets het meer ensieme wat nodig is vir oksidasie, reduksie, hidrolise en dimerisasie reaksies in vergelyking metlewer mikrosome, en in vitro-stelsels, is baie nuwe modelle geneig om geoptimaliseer te word op grond van diehepatosiet stelsel en naboots verder die in vivo omgewing om die behoud van ensiemaktiwiteit in te verlenghepatosiets, en die verlenging van die inkubasietyd bied die moontlikheid om voldoende metaboliese transformasie van stadige metaboliserende middels te monitor[1,2].
In die lig hiervan het IPHASE, as 'n leier in biologiese reagense vir in vitro-navorsing, baanbrekerswerk gedoen met die HepatoMax™-stelsel en HepatoCon™-mediastelsel, gebaseer op die studie van aanhangende primêre hepatosiete en stromale selle van verskeie genera, insluitend mens, aap, hond, rot en muis, ens.hepatosiets as 'n voorbeeld, en beide stelsels is opgestel vir die bepaling van die aktiwiteit en metaboliese stabiliteit van spesifieke ensiemtipes en die toename in reaksiewaarde van metaboliete van die geneesmiddel tolbutamied op 10 dae en 7 dae om die stelsels te verifieer. Metaboliet verhoog reaksie waarde na 10 dae en aktiwiteit en metaboliese stabiliteit van spesifieke ensiem tipes op 7 dae is bepaal om die sisteme te valideer.
- (1) Die twee sistematiese geneesmiddelvalideringskultuurprosesse is soos volg:
IPHASE-HepatoMax™is 'n ko-kultuurstelsel van bevrore ommuurde primêre menslike hepatosiete en stromale selle. Primêre menslike hepatosiete is herleef en geïnkubeer met stromale selle in HepatoP™ medium vir 3 dae om die geneesmiddeltoedieningtoets te begin, en die metabolisme van die geneesmiddel is uitgevoer in serum-vrye HepatoDo™ medium, wat slegs met die geneesmiddel aangevul is sonder om die medium te verander. 'n Totaal van 4, 72, 168 en 240 uur na geneesmiddeltoediening is die toegevoegde waarde van geneesmiddelmetaboliete vir ontleding bepaal.
IPHASE-HepatoCon™, aan die ander kant, is 'n stelsel vir die kweek van bevrore aanhegte primêre menslike hepatosiete in HepatoCon™ medium. Na die herlewing van die primêre menshepatosiets, is die geneesmiddeltoediening-toets uitgevoer na 3 dae van kweek in HepatoCon™-medium alleen, en die daaropvolgende tyd van toediening, die kweeksisteem en die toetsmetodologie was dieselfde as dié van die HepatoMax™-stelsel.
Intussen, om die akkuraatheid en strengheid van die resultate te verseker, het IPHASE 'n mediumbeheer (sel-vry) en 'n stromale selbeheer op dieselfde tyd uitgevoer, met drie herhalings, en die resultate het getoon dat dieIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ sisteme het 'n sterk piek metaboliet reaksie vanaf dag 3 geproduseer, en dat hulle albei 'n sterk metaboliese omsettempo getoon het.
- (2)Dwelmmetabolisme is hoofsaaklik afhanklik van die hepatosietCYP450ensiemstelsel, en die aktiwiteit daarvan kan gemeet word om beter te ondersoek.
DieIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ stelsels het goeie toepaslikheid.
IPHASE het vier kategorieë mediumbeheer (geen selle), HepatoMax™, HepatoCon™ en stromale selle opgestel. Die gebruik van muur-aanhangende primêre menshepatosiets as 'n voorbeeld, die metaboliet verhoog waardes vanCYP1A2, CYP2B6enCYP3A4is op dag 0, 3 en 7 daarna geverifieerhepatosietherstel vir 3 dae deur onderskeidelik finasteried, bupropion en midazolam as die substrate te gebruik. Metabolietverhogingswaardes het getoon dat beideIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ stelsels het aktiewe ensiemaktiwiteit teen dag 7 getoon, wat konsekwent normale geneesmiddelmetabolisme bevorder.
- (3) Benewens die validering van ensiemaktiwiteit, is goeie metaboliese stabiliteit ook 'n belangrike en onontbeerlike stap in die validering van die bruikbaarheid van in vitro modelle.
IPHASE het drie kategorieë van HepatoMax™, HepatoCon™ en stromale selle opgestel om die metaboliese stabiliteit van Tolbutimied oor 'n tydperk van 80 uur te bepaal deur gebruik te maak van aanhangende primêre menslike hepatosiete as 'n voorbeeld, wat 3 dae na resussitasie van primêre toegedien is.hepatosiets, en die resultate het getoon dat beide dieIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ sisteme het albei robuuste metaboliese opruimingsaktiwiteit getoon binne die langste waarde van die toetstyd.
Ter opsomming, IPHASE, as 'n leier in in vitro bio-reagense, het ontwikkelIPHASE HepatoMax™ enIPHASE HepatoCon™ in vitro-modelle gebaseer op muur-toegepaste primêre mens, aap, hond, rot en muishepatosiets en stromale selle van verskeie genera, met uitstekende metaboliese omset, aktiewe ensiemaktiwiteite en kragtige metaboliese opruimingsaktiwiteite, wat nuwe keuses bied vir ons kliënte om lae-opruimingsmiddels te ontwikkel, en is 'n onontbeerlike vennoot om geneesmiddelontdekking te realiseer! DieIPHASE HepatoMax™ enIPHASE HepatoCon™ in vitro-modelle bied uitstekende metaboliese omsettempo's, aktiewe ensiemaktiwiteite en sterk metaboliese opruimingsaktiwiteite, wat nuwe opsies bied vir kliënte om middels met 'n lae opruiming te ontwikkel, en is 'n belangrike vennoot in geneesmiddelontdekking!
Verwysing:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. 'n Nuwe aflosmetode vir die bepaling van lae-opruimingswaardes[J]. Geneesmiddelmetabolisme en -disposisie, 2012, 40(9): 1860-1865.
Postyd: 2024-07-19 17:20:41