Poiché le attività degli enzimi che metabolizzano i farmaci diminuiscono gradualmente con il prolungamento del tempo di incubazione in vitro, i tradizionali modelli di metabolismo in vitro presentano limitazioni quali breve tempo di incubazione, bassa conversione metabolica e limite inferiore di rilevamento elevato (il limite inferiore quantitativo del test CLint è 2,5 μL/(min·106 cellule)), che non possono prevedere con precisione la CLint dei farmaci metabolizzati lentamente.[1]. Nel frattempo,epatocitis hanno più enzimi necessari per le reazioni di ossidazione, riduzione, idrolisi e dimerizzazione rispetto amicrosomi epaticie nei sistemi in vitro, molti nuovi modelli tendono a essere ottimizzati in base alepatociti sistema e imitare ulteriormente l'ambiente in vivo per prolungare la ritenzione dell'attività enzimaticaepatocitis, e il prolungamento del tempo di incubazione offre la possibilità di monitorare una sufficiente trasformazione metabolica dei farmaci a metabolizzazione lenta[1,2].
In considerazione di ciò, IPHASE, in qualità di leader nei reagenti biologici per la ricerca in vitro, è stato pioniere del sistema HepatoMax™ e del sistema HepatoCon™ Media basato sullo studio di epatociti primari aderenti e cellule stromali di vari generi, tra cui umano, scimmia, canino, ratto e topo, ecc. Il sistema HepatoMax™ e il sistema HepatoCon™ Media sono stati sviluppati utilizzando il sistema primario aderente umanoepatocitiCome esempio, entrambi i sistemi sono stati impostati per la determinazione dell'attività e della stabilità metabolica di specifici tipi di enzimi e per l'aumento del valore di risposta dei metaboliti del farmaco tolbutamide a 10 giorni e a 7 giorni per verificare i sistemi. Per convalidare i sistemi sono stati determinati il valore di risposta dell'aumento dei metaboliti a 10 giorni e l'attività e la stabilità metabolica di specifici tipi di enzimi a 7 giorni.
- (1) I due processi sistematici di cultura della validazione dei farmaci sono i seguenti:
IPHASE-HepatoMax™è un sistema di co-coltura di epatociti umani primari con parete congelata e cellule stromali. Gli epatociti umani primari sono stati rianimati e incubati con cellule stromali in mezzo HepatoP™ per 3 giorni per iniziare il test di somministrazione del farmaco, e il metabolismo del farmaco è stato effettuato in mezzo HepatoDo™ privo di siero, che è stato reintegrato solo con il farmaco senza cambiare il mezzo. Un totale di 4, 72, 168 e 240 ore dopo la somministrazione del farmaco è stato determinato per l'analisi il valore aggiunto dei metaboliti del farmaco.
IPHASE-HepatoCon™, d'altra parte, è un sistema per la coltura di epatociti umani primari aderenti congelati nel mezzo HepatoCon™. Dopo aver rianimato l'umano primarioepatocitis, il test di somministrazione del farmaco è stato eseguito dopo 3 giorni di coltura solo nel mezzo HepatoCon™ e il successivo momento di somministrazione, il sistema di coltura e la metodologia di test erano gli stessi del sistema HepatoMax™.
Nel frattempo, per garantire l'accuratezza e il rigore dei risultati, IPHASE ha eseguito contemporaneamente un controllo del mezzo (cell-free) e un controllo delle cellule stromali, con tre repliche, e i risultati hanno mostrato che ilIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ hanno prodotto un forte picco di risposta metabolica dal giorno 3 in poi e entrambi hanno mostrato un forte tasso di turnover metabolico.
- (2) Il metabolismo dei farmaci dipende principalmente dall'epatocitaCYP450sistema enzimatico e la sua attività può essere misurata per esaminarla meglio.
IlIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ i sistemi hanno una buona applicabilità.
IPHASE ha impostato quattro categorie di controllo medio (nessuna cellula), HepatoMax™, HepatoCon™ e cellule stromali. Utilizzando l'essere umano primario aderente al muroepatocitiAd esempio, il metabolita aumenta i valori diCYP1A2, CYP2B6eCYP3A4sono stati verificati ai giorni 0, 3 e 7 successiviepatocitirecupero per 3 giorni utilizzando rispettivamente finasteride, bupropione e midazolam come substrati. I valori di aumento dei metaboliti hanno dimostrato che entrambiIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ i sistemi hanno mostrato un’attività enzimatica attiva entro il giorno 7, promuovendo costantemente il normale metabolismo del farmaco.
- (3)Oltre alla convalida dell'attività enzimatica, anche una buona stabilità metabolica è un passo importante e indispensabile per convalidare l'utilità dei modelli in vitro.
IPHASE ha creato tre categorie di cellule HepatoMax™, HepatoCon™ e cellule stromali per determinare la stabilità metabolica della tolbutimide in un periodo di 80 ore utilizzando come esempio epatociti umani primari aderenti, somministrati 3 giorni dopo la rianimazione delle cellule primarieepatocitis, e i risultati hanno mostrato che entrambi iIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ entrambi i sistemi hanno mostrato una robusta attività di clearance metabolica entro il valore più lungo del tempo di analisi.
In sintesi, IPHASE, leader nei bio-reagenti in vitro, si è sviluppatoIPHASE HepatoMax™ eIPHASE HepatoCon™ modelli in vitro basati su esseri umani primari, scimmie, canini, ratti e topi applicati a pareteepatocitis e cellule stromali di vari generi, con un eccellente turnover metabolico, attività enzimatiche attive e potenti attività di clearance metabolica, che offrono nuove scelte ai nostri clienti per sviluppare farmaci a bassa -clearance e sono un partner indispensabile per realizzare la scoperta di farmaci! IlIPHASE HepatoMax™ eIPHASE HepatoCon™ I modelli in vitro offrono eccellenti tassi di turnover metabolico, attività enzimatiche attive e forti attività di clearance metabolica, fornendo ai clienti nuove opzioni per sviluppare farmaci a bassa -clearance e sono un partner importante nella scoperta di farmaci!
Riferimento:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Un nuovo metodo di relè per determinare valori di gioco bassi[J]. Metabolismo e disposizione dei farmaci, 2012, 40(9): 1860-1865.
Orario di pubblicazione: 2024-07-19 17:20:41