نموذج استقلاب خلايا الكبد الجديد في المختبر يسهل دراسات الحركية الدوائية البطيئة

نظرًا لأن أنشطة إنزيم استقلاب الدواء تتناقص تدريجيًا مع إطالة وقت الحضانة في المختبر، فإن نماذج الاستقلاب التقليدية في المختبر لها قيود مثل وقت الحضانة القصير، والتحويل الأيضي المنخفض والحد الأدنى المرتفع للاكتشاف (الحد الأدنى الكمي لفحص CLint هو 2.5 ميكرولتر / (دقيقة · 106 خلية)))، والتي لا يمكنها التنبؤ بدقة بـ CLint للأدوية التي يتم استقلابها ببطء^[1]. وفي الوقت نفسه،خلية الكبدتحتوي على عدد أكبر من الإنزيمات اللازمة لتفاعلات الأكسدة والاختزال والتحلل المائي والتقليص مقارنة بـميكروسومات الكبد، وفي الأنظمة المختبرية، تميل العديد من النماذج الجديدة إلى التحسين بناءً علىخلية الكبد النظام وتقليد البيئة في الجسم الحي لإطالة فترة الاحتفاظ بنشاط الإنزيم فيهخلية الكبدs، وإطالة فترة الحضانة توفر إمكانية مراقبة التحول الأيضي الكافي للأدوية الأيضية البطيئة^[1,2].

في ضوء ذلك، IPHASE، كشركة رائدة في الكواشف البيولوجية للأبحاث المخبرية، كانت رائدة في نظام HepatoMax™ ونظام HepatoCon™ Media System استنادًا إلى دراسة خلايا الكبد الأولية الملتصقة والخلايا اللحمية من أجناس مختلفة، بما في ذلك الإنسان والقرد والكلاب والجرذ والفأر، وما إلى ذلك. تم تطوير نظام HepatoMax™ ونظام HepatoCon™ Media System باستخدام الإنسان الأساسي الملتصق.خلية الكبدعلى سبيل المثال، وتم إعداد كلا النظامين لتحديد النشاط والاستقرار الأيضي لأنواع إنزيمات محددة وزيادة قيمة استجابة مستقلبات عقار تولبوتاميد عند 10 أيام و7 أيام للتحقق من النظامين. يزيد المستقلب من قيمة الاستجابة في 10 أيام، كما تم تحديد النشاط والاستقرار الأيضي لأنواع معينة من الإنزيمات في 7 أيام للتحقق من صحة الأنظمة.

• (1) العمليتان المنهجيتان لثقافة التحقق من صحة الدواء هما كما يلي:

  ايفاس-هيباتوماكس™هو نظام استزراع مشترك لخلايا الكبد البشرية الأولية والخلايا اللحمية المجمدة. تم إنعاش خلايا الكبد البشرية الأولية واحتضانها بالخلايا اللحمية في وسط HepatoP™ لمدة 3 أيام لبدء اختبار إعطاء الدواء، وتم إجراء استقلاب الدواء في وسط HepatoDo™ المجاني، والذي تم تجديده فقط بالدواء دون تغيير الوسط. تم تحديد القيمة المضافة لنواتج أيض الدواء لتحليلها بعد مرور ما مجموعه 4 و72 و168 و240 ساعة من تناول الدواء.

 

  آيفاس-هيباتوكوون™ومن ناحية أخرى، هو نظام لزراعة خلايا الكبد البشرية الأولية الملتصقة المجمدة في وسط HepatoCon™. بعد إنعاش الإنسان الأساسيخلية الكبدبعد ذلك، تم إجراء اختبار إعطاء الدواء بعد 3 أيام من الاستنبات في وسط HepatoCon™ وحده، وكان الوقت اللاحق للإعطاء ونظام الاستنبات ومنهجية الفحص هو نفس نظام HepatoMax™.

 

وفي الوقت نفسه، وللتأكد من دقة النتائج ودقتها، أجرى IPHASE تحكمًا في الوسط (خلية - حرة) وتحكمًا في الخلايا اللحمية في نفس الوقت، بثلاث مكررات، وأظهرت النتائج أنايفاس-هيباتوماكس™ وآيفاس-هيباتوكوون™ أنتجت الأنظمة ذروة استجابة استقلابية قوية اعتبارًا من اليوم الثالث فصاعدًا، وأظهر كلاهما معدل دوران استقلابيًا قويًا.

 

 

• (2) يعتمد استقلاب الدواء بشكل رئيسي على خلايا الكبدCYP450نظام الإنزيم، ويمكن قياس نشاطه لفحصه بشكل أفضل.

الايفاس-هيباتوماكس™ وآيفاس-هيباتوكوون™ الأنظمة لديها قابلية تطبيق جيدة.

قام IPHASE بإعداد أربع فئات من التحكم المتوسط ​​(بدون خلايا)، HepatoMax™، HepatoCon™ والخلايا اللحمية. باستخدام الجدار-الإنسان الأساسي الملتصقخلية الكبدعلى سبيل المثال، يزيد المستقلب قيمCYP1A2, CYP2B6وCYP3A4تم التحقق منها في اليوم 0 و3 و7 بعد ذلكخلية الكبدالانتعاش لمدة 3 أيام باستخدام فيناسترايد، البوبروبيون والميدازولام كركائز، على التوالي. وأظهرت قيم زيادة الأيض أن كليهماايفاس-هيباتوماكس™ وآيفاس-هيباتوكوون™ أظهرت الأنظمة نشاطًا إنزيميًا نشطًا في اليوم السابع، مما يعزز بشكل مستمر عملية التمثيل الغذائي الطبيعي للدواء.

 

• (3) بالإضافة إلى التحقق من صحة نشاط الإنزيم، يعد الاستقرار الأيضي الجيد أيضًا خطوة مهمة ولا غنى عنها في التحقق من فائدة النماذج المختبرية.

قام IPHASE بإعداد ثلاث فئات من HepatoMax™ وHepatoCon™ والخلايا اللحمية لتحديد الاستقرار الأيضي للتولبوتيميد على مدى فترة 80 ساعة باستخدام خلايا الكبد البشرية الأولية الملتصقة كمثال، والتي تم إعطاؤها بعد 3 أيام من إنعاش المرحلة الأولية.خلية الكبدس، وأظهرت النتائج أن كلا منايفاس-هيباتوماكس™ وآيفاس-هيباتوكوون™ أظهر كلا النظامين نشاطًا قويًا للتخليص الأيضي خلال أطول قيمة لوقت الفحص.

 

باختصار، لقد تطور IPHASE، كشركة رائدة في الكواشف الحيوية المخبريةايفاس هيباتوماكس™ وإيفاس هيباتوكون™ نماذج في المختبر مبنية على الجدار - تم تطبيق الإنسان الأساسي والقرد والكلاب والجرذ والفأرخلية الكبدوالخلايا اللحمية من أجناس مختلفة، مع معدل دوران استقلابي ممتاز، وأنشطة إنزيمية نشطة وأنشطة تصفية استقلابية قوية، والتي تقدم خيارات جديدة لعملائنا لتطوير أدوية منخفضة التصفية، وهي شريك لا غنى عنه لتحقيق اكتشاف الأدوية! الايفاس هيباتوماكس™ وإيفاس هيباتوكون™ تقدم النماذج المختبرية معدلات دوران استقلابية ممتازة، وأنشطة إنزيمية نشطة وأنشطة تصفية استقلابية قوية، مما يوفر خيارات جديدة للعملاء لتطوير أدوية منخفضة التصفية، كما أنها شريك مهم في اكتشاف الأدوية!

 

المرجع:

[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.

[2] دي إل، ترابا بي، أوباتش آر إس، وآخرون. طريقة ترحيل جديدة لتحديد قيم الخلوص المنخفضة[J]. استقلاب الدواء والتخلص منه، 2012، 40(9): 1860-1865.