Ny in vitro-hepatocytmetabolismemodel letter farmakokinetiske undersøgelser med langsom metabolisering

Da de lægemiddelmetaboliserende enzymaktiviteter gradvist aftager med forlængelsen af in vitro-inkubationstid, har traditionelle in vitro-metabolismemodeller begrænsninger såsom kort inkubationstid, lav metabolisk omdannelse og høj nedre detektionsgrænse (den kvantitative nedre grænse for CLint-assay er 2,5 μL /(min·106 celler)), som ikke kan forudsige CL-lægemidler nøjagtigt af langsomt metaboliserede lægemidler.^[1]. I mellemtidenhepatocyts har flere enzymer, der kræves til oxidation, reduktion, hydrolyse og dimeriseringsreaktioner sammenlignet medlevermikrosomer, og in vitro-systemer har mange nye modeller en tendens til at være optimeret baseret påhepatocyt system og yderligere efterligne in vivo-miljøet for at forlænge retentionen af enzymaktivitet ihepatocyts, og forlængelsen af inkubationstiden giver mulighed for at overvåge tilstrækkelig metabolisk transformation af langsomt metaboliserende lægemidler^[1,2].

I lyset af dette har IPHASE, som førende inden for biologiske reagenser til in vitro-forskning, været banebrydende for HepatoMax™-systemet og HepatoCon™-mediesystemet baseret på studiet af adhærente primære hepatocytter og stromaceller fra forskellige slægter, herunder mennesker, aber, hunde, rotter og mus osv.hepatocyts som et eksempel, og begge systemer blev sat op til bestemmelse af aktiviteten og metabolisk stabilitet af specifikke enzymtyper og stigningen i responsværdien af metabolitter af lægemidlet tolbutamid efter 10 dage og 7 dage for at verificere systemerne. Metabolitter øger responsværdien efter 10 dage, og aktivitet og metabolisk stabilitet af specifikke enzymtyper efter 7 dage blev bestemt for at validere systemerne.

• (1) De to systematiske lægemiddelvalideringskulturprocesser er som følger:

  IPHASE-HepatoMax™er et samkultursystem af frosne væggede primære humane hepatocytter og stromaceller. Primære humane hepatocytter blev genoplivet og inkuberet med stromaceller i HepatoP™-medium i 3 dage for at starte lægemiddeladministrationsanalysen, og stofskiftet af lægemidlet blev udført i serum-frit HepatoDo™-medium, som kun blev genopfyldt med lægemidlet uden at ændre mediet. I alt 4, 72, 168 og 240 timer efter lægemiddeladministration blev værditilvæksten af ​​lægemiddelmetabolitter bestemt til analyse.

 

  IPHASE-HepatoCon™på den anden side er et system til dyrkning af frosne adhærente primære humane hepatocytter i HepatoCon™-medium. Efter genoplivning af det primære menneskehepatocyts blev lægemiddeladministrationsassayet udført efter 3 dages dyrkning i HepatoCon™-medium alene, og det efterfølgende tidspunkt for administration var dyrkningssystemet og assaymetodologien de samme som for HepatoMax™-systemet.

 

For at sikre resultaternes nøjagtighed og stringens udførte IPHASE i mellemtiden en mediumkontrol (celle-fri) og en stromalcellekontrol på samme tid med tre replikationer, og resultaterne viste, atIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer producerede et stærkt topmetabolitrespons fra dag 3 og frem, og at de begge viste en stærk metabolisk omsætningshastighed.

 

 

• (2) Lægemiddelmetabolisme er hovedsageligt afhængig af hepatocyttenCYP450enzymsystem, og dets aktivitet kan måles for bedre at undersøge.

DenIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer har god anvendelighed.

IPHASE opsatte fire kategorier af medium kontrol (ingen celler), HepatoMax™, HepatoCon™ og stromale celler. Ved hjælp af vægvedhængende primært menneskehepatocyts som et eksempel, metabolitten øge værdier afCYP1A2, CYP2B6ogCYP3A4blev verificeret på dag 0, 3 og 7 efterhepatocytrestitution i 3 dage med henholdsvis finasterid, bupropion og midazolam som substrater. Metabolitstigningsværdier viste, at begge deleIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer viste aktiv enzymaktivitet på dag 7, hvilket konsekvent fremmede normal lægemiddelmetabolisme.

 

• (3) Ud over valideringen af enzymaktivitet er god metabolisk stabilitet også et vigtigt og uundværligt skridt i valideringen af in vitro-modellers anvendelighed.

IPHASE opsatte tre kategorier af HepatoMax™, HepatoCon™ og stromaceller for at bestemme den metaboliske stabilitet af Tolbutimid over en periode på 80 timer ved at bruge adhærente primære humane hepatocytter som et eksempel, som blev administreret 3 dage efter genoplivning af primærehepatocyts, og resultaterne viste, at bådeIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer viste begge robust metabolisk clearance-aktivitet inden for den længste værdi af assaytiden.

 

Sammenfattende har IPHASE, som førende inden for in vitro bio-reagenser, udviklet sigIPHASE HepatoMax™ ogIPHASE HepatoCon™ in vitro-modeller baseret på væg-anvendt primært menneske, abe, hund, rotte og mushepatocyts og stromaceller af forskellige slægter, med fremragende metabolisk omsætning, aktive enzymaktiviteter og kraftfulde metaboliske clearance-aktiviteter, som giver vores kunder nye muligheder for at udvikle lav-clearance-lægemidler og er en uundværlig partner til at realisere lægemiddelopdagelse! DenIPHASE HepatoMax™ ogIPHASE HepatoCon™ in vitro-modeller tilbyder fremragende metaboliske omsætningshastigheder, aktive enzymaktiviteter og stærke metaboliske clearance-aktiviteter, hvilket giver kunderne nye muligheder for at udvikle lav-clearance-lægemidler og er en vigtig partner i lægemiddelopdagelse!

 

Reference:

[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.

[2] Di L, Trapa P, Obach RS, et al. En ny relæmetode til bestemmelse af lave-clearance-værdier[J]. Lægemiddelmetabolisme og disposition, 2012, 40(9): 1860-1865.