Karena aktivitas enzim pemetabolisme obat secara bertahap menurun seiring dengan perpanjangan waktu inkubasi in vitro, model metabolisme in vitro tradisional memiliki keterbatasan seperti waktu inkubasi yang singkat, konversi metabolik yang rendah, dan batas bawah deteksi yang tinggi (batas bawah kuantitatif uji CLint adalah 2,5 μL /( min·106 sel)), yang tidak dapat secara akurat memprediksi CLint obat yang dimetabolisme lambat[1]. Sementara itu,hepatosits memiliki lebih banyak enzim yang dibutuhkan untuk reaksi oksidasi, reduksi, hidrolisis dan dimerisasi dibandingkan denganmikrosom hati, dan dalam sistem in vitro, banyak model baru yang cenderung dioptimalkan berdasarkanhepatosit sistem dan selanjutnya meniru lingkungan in vivo untuk memperpanjang retensi aktivitas enzim di dalamnyahepatosits, dan perpanjangan waktu inkubasi memberikan kemungkinan untuk memantau transformasi metabolik yang memadai dari obat-obatan yang bermetabolisme lambat[1,2].
Mengingat hal ini, IPHASE, sebagai pemimpin dalam reagen biologis untuk penelitian in vitro, telah memelopori Sistem HepatoMax™ dan Sistem Media HepatoCon™ berdasarkan studi terhadap hepatosit primer dan sel stroma yang melekat dari berbagai genera, termasuk manusia, monyet, anjing, tikus, dan tikus, dll. Sistem HepatoMax™ dan Sistem Media HepatoCon™ dikembangkan menggunakan manusia primer yang patuh.hepatosits sebagai contoh, dan kedua sistem disiapkan untuk penentuan aktivitas dan stabilitas metabolik jenis enzim tertentu dan peningkatan nilai respons metabolit obat tolbutamida pada hari 10 dan 7 hari untuk memverifikasi sistem. Metabolit meningkatkan nilai respons pada 10 hari dan aktivitas serta stabilitas metabolisme jenis enzim tertentu pada 7 hari ditentukan untuk memvalidasi sistem.
- (1) Dua proses budaya validasi obat yang sistematis adalah sebagai berikut:
IPHASE-HepatoMax™adalah sistem kultur bersama dari hepatosit dan sel stroma primer manusia yang berdinding beku. Hepatosit primer manusia diresusitasi dan diinkubasi dengan sel stroma dalam medium HepatoP™ selama 3 hari untuk memulai pengujian pemberian obat, dan metabolisme obat dilakukan dalam medium serum-bebas HepatoDo™, yang hanya diisi ulang dengan obat tanpa mengubah media. Sebanyak 4, 72, 168 dan 240 jam setelah pemberian obat, nilai tambah metabolit obat ditentukan untuk dianalisis.
IPHASE-HepatoCon™, di sisi lain, adalah sistem untuk membiakkan hepatosit manusia primer yang melekat dan beku dalam media HepatoCon™. Setelah menyadarkan manusia utamahepatosits, pengujian pemberian obat dilakukan setelah 3 hari kultur dalam media HepatoCon™ saja, dan waktu pemberian berikutnya, sistem kultur dan metodologi pengujian sama dengan sistem HepatoMax™.
Sedangkan untuk menjamin keakuratan dan ketelitian hasil, IPHASE melakukan kontrol medium (sel-bebas) dan kontrol sel stroma secara bersamaan, dengan tiga ulangan, dan hasilnya menunjukkan bahwaIPHASE-HepatoMax™ danIPHASE-HepatoCon™ sistem menghasilkan respons metabolit puncak yang kuat sejak hari ke-3 dan seterusnya, dan keduanya menunjukkan tingkat pergantian metabolisme yang kuat.
- (2) Metabolisme obat terutama bergantung pada hepatositCYP450sistem enzim, dan aktivitasnya dapat diukur untuk pemeriksaan yang lebih baik.
ItuIPHASE-HepatoMax™ danIPHASE-HepatoCon™ sistem mempunyai penerapan yang baik.
IPHASE menyiapkan empat kategori kontrol sedang (tanpa sel), HepatoMax™, HepatoCon™, dan sel stroma. Menggunakan dinding-manusia primer yang melekathepatositSebagai contoh, metabolit meningkatkan nilaiCYP1A2, CYP2B6danCYP3A4diverifikasi pada hari 0, 3 dan 7 setelahnyahepatositpemulihan selama 3 hari menggunakan substrat finasteride, bupropion dan midazolam. Nilai peningkatan metabolisme menunjukkan keduanyaIPHASE-HepatoMax™ danIPHASE-HepatoCon™ sistem menunjukkan aktivitas enzim aktif pada hari ke 7, secara konsisten meningkatkan metabolisme obat normal.
- (3) Selain validasi aktivitas enzim, stabilitas metabolisme yang baik juga merupakan langkah penting dan sangat diperlukan dalam memvalidasi kegunaan model in vitro.
IPHASE menetapkan tiga kategori HepatoMax™, HepatoCon™ dan sel stroma untuk menentukan stabilitas metabolik Tolbutimide selama periode 80 jam menggunakan contoh hepatosit manusia primer yang melekat, yang diberikan 3 hari setelah resusitasi sel primer.hepatosits, dan hasilnya menunjukkan bahwa keduanyaIPHASE-HepatoMax™ danIPHASE-HepatoCon™ sistem keduanya menunjukkan aktivitas pembersihan metabolik yang kuat dalam nilai waktu pengujian yang paling lama.
Singkatnya, IPHASE, sebagai pemimpin dalam bio-reagen in vitro, telah berkembangIPHASE HepatoMax™ danIPHASE HepatoCon™ model in vitro berdasarkan dinding - diterapkan pada manusia primer, monyet, anjing, tikus dan mencithepatosits dan sel stroma dari berbagai genera, dengan pergantian metabolisme yang sangat baik, aktivitas enzim aktif, dan aktivitas pembersihan metabolik yang kuat, yang menawarkan pilihan baru bagi pelanggan kami untuk mengembangkan obat dengan izin rendah, dan merupakan mitra yang sangat diperlukan untuk mewujudkan penemuan obat! ItuIPHASE HepatoMax™ danIPHASE HepatoCon™ model in vitro menawarkan tingkat pergantian metabolik yang sangat baik, aktivitas enzim aktif, dan aktivitas pembersihan metabolik yang kuat, memberikan pilihan baru bagi pelanggan untuk mengembangkan obat dengan izin rendah, dan merupakan mitra penting dalam penemuan obat!
Referensi:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach RS, dkk. Metode relai baru untuk menentukan nilai jarak rendah-[J]. Metabolisme dan disposisi obat, 2012, 40(9): 1860-1865.
Waktu posting: 2024-07-19 17:20:41