Da die Aktivität der Arzneimittel metabolisierenden Enzyme mit der Verlängerung der In-vitro-Inkubationszeit allmählich abnimmt, weisen herkömmliche In-vitro-Metabolismusmodelle Einschränkungen wie kurze Inkubationszeit, geringe Stoffwechselumwandlung und eine hohe untere Nachweisgrenze auf (die quantitative Untergrenze des CLint-Assays liegt bei 2,5 μl/(min·106 Zellen)), wodurch der CLint von langsam metabolisierten Arzneimitteln nicht genau vorhergesagt werden kann[1]. Inzwischen,Hepatozytens haben im Vergleich zu mehr Enzyme, die für Oxidations-, Reduktions-, Hydrolyse- und Dimerisierungsreaktionen erforderlich sindLebermikrosomenund in In-vitro-Systemen werden viele neuartige Modelle tendenziell auf der Grundlage optimiertHepatozyten System und imitieren darüber hinaus die In-vivo-Umgebung, um die Beibehaltung der Enzymaktivität zu verlängernHepatozytens, und die Verlängerung der Inkubationszeit bietet die Möglichkeit, eine ausreichende metabolische Umwandlung langsam metabolisierender Arzneimittel zu überwachen[1,2].
Vor diesem Hintergrund hat IPHASE als führender Anbieter von biologischen Reagenzien für die In-vitro-Forschung das HepatoMax™-System und das HepatoCon™-Mediensystem entwickelt, die auf der Untersuchung adhärenter primärer Hepatozyten und Stromazellen verschiedener Gattungen basieren, darunter Menschen, Affen, Hunde, Ratten und Mäuse usw. Das HepatoMax™-System und das HepatoCon™-Mediensystem wurden unter Verwendung des adhärenten primären Menschen entwickeltHepatozytens als Beispiel, und beide Systeme wurden zur Bestimmung der Aktivität und metabolischen Stabilität spezifischer Enzymtypen und des Anstiegs des Reaktionswerts von Metaboliten des Arzneimittels Tolbutamid nach 10 Tagen und 7 Tagen eingerichtet, um die Systeme zu verifizieren. Zur Validierung der Systeme wurden der Metabolitenanstiegsreaktionswert nach 10 Tagen sowie die Aktivität und Stoffwechselstabilität spezifischer Enzymtypen nach 7 Tagen bestimmt.
- (1) Die beiden systematischen Prozesse der Arzneimittelvalidierungskultur sind wie folgt:
IPHASE-HepatoMax™ist ein Kokultursystem aus gefrorenen, ummantelten primären menschlichen Hepatozyten und Stromazellen. Primäre menschliche Hepatozyten wurden wiederbelebt und mit Stromazellen in HepatoP™-Medium drei Tage lang inkubiert, um den Arzneimittelverabreichungstest zu starten, und der Metabolismus des Arzneimittels wurde in serumfreiem HepatoDo™-Medium durchgeführt, das nur mit dem Arzneimittel aufgefüllt wurde, ohne das Medium zu wechseln. Insgesamt 4, 72, 168 und 240 Stunden nach der Arzneimittelverabreichung wurde der Mehrwert der Arzneimittelmetaboliten für die Analyse ermittelt.
IPHASE-HepatoCon™hingegen ist ein System zur Kultivierung gefrorener adhärenter primärer menschlicher Hepatozyten in HepatoCon™-Medium. Nach der Wiederbelebung des primären MenschenHepatozytens, der Arzneimittelverabreichungstest wurde nach 3-tägiger Kultur in HepatoCon™-Medium allein durchgeführt, und der anschließende Verabreichungszeitpunkt, das Kultursystem und die Testmethodik waren die gleichen wie beim HepatoMax™-System.
Um die Genauigkeit und Genauigkeit der Ergebnisse sicherzustellen, führte IPHASE gleichzeitig eine mittlere Kontrolle (zellfrei) und eine Stromazellenkontrolle mit drei Wiederholungen durch, und die Ergebnisse zeigten, dass dieIPHASE-HepatoMax™ undIPHASE-HepatoCon™ Systeme erzeugten ab Tag 3 eine starke Spitzenreaktion auf Metaboliten und zeigten beide eine starke Stoffwechselumsatzrate.
- (2) Der Arzneimittelstoffwechsel hängt hauptsächlich vom Hepatozyten abCYP450Enzymsystem, und seine Aktivität kann gemessen werden, um es besser untersuchen zu können.
DieIPHASE-HepatoMax™ undIPHASE-HepatoCon™ Systeme haben eine gute Anwendbarkeit.
IPHASE richtete vier Kategorien der Mediumkontrolle (keine Zellen) ein: HepatoMax™, HepatoCon™ und Stromazellen. Verwendung von wall-adherent primärem MenschenHepatozytens als Beispiel, der Metabolit erhöht die Werte vonCYP1A2, CYP2B6undCYP3A4wurden am Tag 0, 3 und 7 danach überprüftHepatozytenErholung über 3 Tage unter Verwendung von Finasterid, Bupropion bzw. Midazolam als Substraten. Die Metabolitenanstiegswerte zeigten, dass beides der Fall warIPHASE-HepatoMax™ undIPHASE-HepatoCon™ Die Systeme zeigten am siebten Tag eine aktive Enzymaktivität, was durchgängig den normalen Arzneimittelstoffwechsel förderte.
- (3) Neben der Validierung der Enzymaktivität ist eine gute Stoffwechselstabilität auch ein wichtiger und unverzichtbarer Schritt bei der Validierung der Nützlichkeit von In-vitro-Modellen.
IPHASE richtete drei Kategorien von HepatoMax™-, HepatoCon™- und Stromazellen ein, um die metabolische Stabilität von Tolbutimid über einen Zeitraum von 80 Stunden am Beispiel adhärenter primärer menschlicher Hepatozyten zu bestimmen, die 3 Tage nach der Wiederbelebung der primären Zellen verabreicht wurdenHepatozytens, und die Ergebnisse zeigten, dass beideIPHASE-HepatoMax™ undIPHASE-HepatoCon™ Beide Systeme zeigten innerhalb der längsten Testzeit eine robuste metabolische Clearance-Aktivität.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass sich IPHASE als führender Anbieter von In-vitro-Bioreagenzien entwickelt hatIPHASE HepatoMax™ undIPHASE HepatoCon™ In-vitro-Modelle basierend auf Wand-angewandten primären Menschen, Affen, Hunden, Ratten und MäusenHepatozytens- und Stromazellen verschiedener Gattungen mit ausgezeichnetem Stoffwechselumsatz, aktiven Enzymaktivitäten und leistungsstarken metabolischen Clearance-Aktivitäten, die unseren Kunden neue Möglichkeiten für die Entwicklung von Arzneimitteln mit geringer Clearance bieten und ein unverzichtbarer Partner für die Realisierung der Arzneimittelforschung sind! DieIPHASE HepatoMax™ undIPHASE HepatoCon™ In-vitro-Modelle bieten hervorragende metabolische Umsatzraten, aktive Enzymaktivitäten und starke metabolische Clearance-Aktivitäten, bieten Kunden neue Möglichkeiten zur Entwicklung von Arzneimitteln mit geringer Clearance und sind ein wichtiger Partner bei der Arzneimittelentwicklung!
Referenz:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach RS, et al. Ein neuartiges Relaisverfahren zur Bestimmung niedriger-Freiheitswerte[J]. Arzneimittelstoffwechsel und -disposition, 2012, 40(9): 1860-1865.
Zeitpunkt der Veröffentlichung: 2024-07-19 17:20:41