Étant donné que les activités des enzymes métabolisant les médicaments diminuent progressivement avec la prolongation du temps d'incubation in vitro, les modèles de métabolisme in vitro traditionnels présentent des limites telles qu'un temps d'incubation court, une faible conversion métabolique et une limite inférieure élevée de détection (la limite inférieure quantitative du test CLint est de 2,5 μL / (min · 106 cellules)), ce qui ne peut pas prédire avec précision la CLint des médicaments lentement métabolisés.[1]. Pendant ce temps,hépatocytes ont plus d'enzymes nécessaires aux réactions d'oxydation, de réduction, d'hydrolyse et de dimérisation par rapport auxmicrosomes hépatiques, et dans les systèmes in vitro, de nombreux nouveaux modèles ont tendance à être optimisés sur la base deshépatocyte système et imiter davantage l’environnement in vivo pour prolonger la rétention de l’activité enzymatique danshépatocytes, et la prolongation du temps d'incubation offre la possibilité de surveiller une transformation métabolique suffisante des médicaments à métabolisme lent[1,2].
Dans cette optique, IPHASE, en tant que leader des réactifs biologiques pour la recherche in vitro, a été le pionnier du système HepatoMax™ et du système HepatoCon™ Media basés sur l'étude des hépatocytes primaires adhérents et des cellules stromales de divers genres, notamment l'humain, le singe, le canin, le rat et la souris, etc. Le système HepatoMax™ et le système HepatoCon™ Media ont été développés en utilisant le système primaire adhérent humain.hépatocytes à titre d'exemple, et les deux systèmes ont été mis en place pour la détermination de l'activité et de la stabilité métabolique de types d'enzymes spécifiques et l'augmentation de la valeur de réponse des métabolites du médicament tolbutamide à 10 jours et 7 jours pour vérifier les systèmes. La valeur de réponse d'augmentation des métabolites à 10 jours et l'activité et la stabilité métabolique de types d'enzymes spécifiques à 7 jours ont été déterminées pour valider les systèmes.
- (1)Les deux processus systématiques de culture de validation des médicaments sont les suivants :
IPHASE-HépatoMax™est un système de co-culture d'hépatocytes humains primaires à parois congelées et de cellules stromales. Les hépatocytes humains primaires ont été réanimés et incubés avec des cellules stromales dans un milieu HepatoP™ pendant 3 jours pour démarrer le test d'administration du médicament, et le métabolisme du médicament a été effectué dans un milieu HepatoDo™ sans sérum, qui a été reconstitué uniquement avec le médicament sans changer de milieu. Au total, 4, 72, 168 et 240 heures après l'administration du médicament, la valeur ajoutée des métabolites du médicament a été déterminée pour analyse.
IPHASE-HépatoCon™, d'autre part, est un système permettant de cultiver des hépatocytes humains primaires adhérents congelés dans un milieu HepatoCon™. Après avoir ressuscité le humain primairehépatocytes, le test d'administration du médicament a été réalisé après 3 jours de culture dans du milieu HepatoCon™ seul, et le temps d'administration ultérieur, le système de culture et la méthodologie de test étaient les mêmes que ceux du système HepatoMax™.
Parallèlement, pour garantir l'exactitude et la rigueur des résultats, IPHASE a effectué simultanément un contrôle moyen (cellulaire - libre) et un contrôle des cellules stromales, avec trois réplications, et les résultats ont montré que leIPHASE-HépatoMax™ etIPHASE-HépatoCon™ Les systèmes ont produit une forte réponse métabolite maximale à partir du troisième jour et ont tous deux montré un fort taux de renouvellement métabolique.
- (2) Le métabolisme des médicaments dépend principalement des hépatocytesCYP450système enzymatique, et son activité peut être mesurée pour mieux examiner.
LeIPHASE-HépatoMax™ etIPHASE-HépatoCon™ les systèmes ont une bonne applicabilité.
IPHASE a mis en place quatre catégories de contrôle moyen (sans cellules), HepatoMax™, HepatoCon™ et cellules stromales. Utilisation d'un humain primaire mural-adhérenthépatocytes à titre d'exemple, le métabolite augmente les valeurs deCYP1A2, CYP2B6etCYP3A4ont été vérifiés aux jours 0, 3 et 7 aprèshépatocyterécupération pendant 3 jours en utilisant respectivement le finastéride, le bupropion et le midazolam comme substrats. Les valeurs d'augmentation des métabolites ont montré que les deuxIPHASE-HépatoMax™ etIPHASE-HépatoCon™ Les systèmes ont montré une activité enzymatique active au jour 7, favorisant systématiquement le métabolisme normal du médicament.
- (3) Outre la validation de l'activité enzymatique, une bonne stabilité métabolique constitue également une étape importante et indispensable pour valider l'utilité des modèles in vitro.
L'IPHASE a mis en place trois catégories de cellules HepatoMax™, HepatoCon™ et stromales pour déterminer la stabilité métabolique du tolbutimide sur une période de 80 heures en utilisant comme exemple des hépatocytes humains primaires adhérents, qui ont été administrés 3 jours après la réanimation des cellules primaires.hépatocytes, et les résultats ont montré que les deuxIPHASE-HépatoMax™ etIPHASE-HépatoCon™ les deux systèmes ont montré une activité de clairance métabolique robuste pendant la valeur la plus longue de la durée du test.
En résumé, IPHASE, en tant que leader des bio-réactifs in vitro, a développéIPHASE HépatoMax™ etIPHASE HépatoCon™ modèles in vitro basés sur des applications murales primaires humaines, singes, canines, rats et sourishépatocytes et cellules stromales de divers genres, avec un excellent renouvellement métabolique, des activités enzymatiques actives et de puissantes activités de clairance métabolique, qui offrent de nouveaux choix à nos clients pour développer des médicaments à faible clairance, et sont un partenaire indispensable pour réaliser la découverte de médicaments ! LeIPHASE HépatoMax™ etIPHASE HépatoCon™ Les modèles in vitro offrent d'excellents taux de renouvellement métabolique, des activités enzymatiques actives et de fortes activités de clairance métabolique, offrant ainsi de nouvelles options aux clients pour développer des médicaments à faible clairance, et constituent un partenaire important dans la découverte de médicaments !
Référence :
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach RS et al. Une nouvelle méthode de relais pour déterminer les valeurs de faible jeu [J]. Métabolisme et élimination des médicaments, 2012, 40(9) : 1860-1865.
Heure de publication : 2024-07-19 17:20:41