Kuna ravimit metaboliseerivate ensüümide aktiivsus väheneb järk-järgult koos in vitro inkubatsiooniaja pikenemisega, on traditsioonilistel in vitro metabolismi mudelitel piirangud, nagu lühike inkubatsiooniaeg, madal metaboolne konversioon ja kõrge alumine avastamispiir (CLint-testi kvantitatiivne alumine piir on 2,5 μL /( min·106 rakku)), mis ei suuda täpselt ennustada aeglaselt metaboliseeruvate ravimite CLint-i.[1]. Vahepealhepatotsüüts on võrreldes oksüdatsiooni-, redutseerimis-, hüdrolüüsi- ja dimerisatsioonireaktsioonidega rohkem ensüümemaksa mikrosoomid, ja in vitro süsteemides kipuvad paljud uued mudelid olema optimeeritud selle põhjalhepatotsüüt süsteemi ja jäljendada veelgi in vivo keskkonda, et pikendada ensüümi aktiivsuse säilimisthepatotsüüts ja inkubatsiooniaja pikenemine annab võimaluse jälgida aeglaselt metaboliseeruvate ravimite piisavat metaboolset transformatsiooni.[1,2].
Seda silmas pidades on IPHASE kui in vitro uuringutes kasutatavate bioloogiliste reaktiivide turuliider olnud teerajajaks HepatoMax™ System ja HepatoCon™ Media System, mis põhinevad kleepuvate primaarsete hepatotsüütide ja eri perekondade stroomarakkude uurimisel, sealhulgas inimese, ahvi, koera, roti ja hiire jne abil.hepatotsüüts näitena ja mõlemad süsteemid loodi konkreetsete ensüümitüüpide aktiivsuse ja metaboolse stabiilsuse määramiseks ning ravimi tolbutamiidi metaboliitide vastuse väärtuse suurendamiseks 10 päeva ja 7 päeva pärast süsteemide kontrollimiseks. Süsteemide valideerimiseks määrati metaboliitide suurenemise vastuse väärtus 10 päeva pärast ning spetsiifiliste ensüümitüüpide aktiivsus ja metaboolne stabiilsus 7 päeva pärast.
- (1) Kaks süstemaatilist ravimite valideerimiskultuuri protsessi on järgmised:
IPHASE-HepatoMax™on külmutatud seinaga primaarsete inimese hepatotsüütide ja stroomarakkude kaaskultuurisüsteem. Primaarsed inimese hepatotsüüdid elustati ja inkubeeriti stroomarakkudega HepatoP™ söötmes 3 päeva, et alustada ravimi manustamistesti ning ravimi metabolism viidi läbi seerumivabas HepatoDo™ söötmes, mida täiendati ainult ravimiga söödet muutmata. Kokku 4, 72, 168 ja 240 tundi pärast ravimi manustamist määrati analüüsiks ravimi metaboliitide lisandväärtus.
IPHASE-HepatoCon™teisest küljest on süsteem külmutatud kleepunud primaarsete inimese hepatotsüütide kultiveerimiseks HepatoCon™ söötmes. Pärast esmase inimese elustamisthepatotsüüts, ravimi manustamise test viidi läbi pärast 3-päevast kasvatamist ainult HepatoCon™ söötmes ning järgnev manustamisaeg, kultiveerimissüsteem ja analüüsi metoodika olid samad, mis HepatoMax™ süsteemil.
Vahepeal teostas IPHASE tulemuste täpsuse ja täpsuse tagamiseks söötmekontrolli (rakuvaba) ja stroomarakkude kontrolli samaaegselt kolme kordusega ning tulemused näitasid, etIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ süsteemid andsid alates 3. päevast tugeva maksimaalse metaboliidi vastuse ja mõlemad näitasid tugevat metaboolse ringluse kiirust.
- (2) Ravimite metabolism sõltub peamiselt hepatotsüütidestCYP450ensüümsüsteemi ja selle aktiivsust saab paremini uurida.
TheIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ süsteemidel on hea rakendatavus.
IPHASE seadis sisse neli söötmekontrolli kategooriat (rakud puuduvad), HepatoMax™, HepatoCon™ ja stroomarakud. Kasutades seina-kleepuvat esmast inimesthepatotsüütNäiteks metaboliitide väärtused suurenevadCYP1A2, CYP2B6jaCYP3A4kontrolliti päeval 0, 3 ja 7 pärast sedahepatotsüüttaastumine 3 päeva jooksul, kasutades substraatidena vastavalt finasteriidi, bupropiooni ja midasolaami. Metaboliidi suurenemise väärtused näitasid, et mõlemadIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ süsteemid näitasid 7. päevaks aktiivset ensüümi aktiivsust, soodustades järjekindlalt normaalset ravimite metabolismi.
- (3)Lisaks ensüümi aktiivsuse valideerimisele on hea metaboolne stabiilsus ka oluline ja asendamatu samm in vitro mudelite kasulikkuse kinnitamisel.
IPHASE seadis kolm kategooriat HepatoMax™, HepatoCon™ ja stroomarakud, et määrata tolbutimiidi metaboolne stabiilsus 80 tunni jooksul, kasutades näiteks kleepuvaid primaarseid inimese hepatotsüüte, mida manustati 3 päeva pärast esmase elustamisehepatotsüüts ja tulemused näitasid, et mõlemadIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ Mõlemad süsteemid näitasid tugevat metaboolset kliirensi aktiivsust testi pikima väärtuse jooksul.
Kokkuvõttes on IPHASE kui in vitro bioreagentide liider arenenudIPHASE HepatoMax™ jaIPHASE HepatoCon™ in vitro mudelid, mis põhinevad seina-rakendatud primaarsel inimesel, ahvil, koeral, rotil ja hiirelhepatotsüütsuurepärase metaboolse käibe, aktiivse ensüümi aktiivsuse ja võimsa metaboolse kliirensi tegevusega s ja erinevate perekondadega stroomarakud, mis pakuvad meie klientidele uusi valikuid madala kliirensiga ravimite väljatöötamiseks ja on asendamatuks partneriks ravimite avastamise elluviimisel! TheIPHASE HepatoMax™ jaIPHASE HepatoCon™ in vitro mudelid pakuvad suurepärast ainevahetuse kiirust, aktiivset ensüümi aktiivsust ja tugevat metaboolset kliirensit, pakkudes klientidele uusi võimalusi madala kliirensiga ravimite väljatöötamiseks ja on oluline partner ravimite avastamisel!
Viide:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S jt. Uudne releemeetod madalate kliirensi väärtuste määramiseks[J]. Ravimite metabolism ja dispositsioon, 2012, 40(9): 1860-1865.
Postitusaeg: 2024-07-19 17:20:41