Budući da se aktivnosti enzima koji metaboliziraju lijek postupno smanjuju s produljenjem in vitro vremena inkubacije, tradicionalni in vitro modeli metabolizma imaju ograničenja kao što su kratko vrijeme inkubacije, niska metabolička konverzija i visoka donja granica detekcije (kvantitativna donja granica CLint testa je 2,5 μL /(min·106 stanica)), što ne može točno predvidjeti CLint sporo metaboliziranih lijekova[1]. u međuvremenu,hepatocitimaju više enzima potrebnih za reakcije oksidacije, redukcije, hidrolize i dimerizacije u usporedbi smikrosomi jetre, au in vitro sustavima mnogi se novi modeli optimiziraju na temeljuhepatocit sustava i dalje oponaša in vivo okoliš kako bi se produžilo zadržavanje aktivnosti enzima uhepatocits, a produljenje vremena inkubacije daje mogućnost praćenja dovoljne metaboličke transformacije sporo metabolizirajućih lijekova[1,2].
S obzirom na to, IPHASE, kao predvodnik u biološkim reagensima za in vitro istraživanja, uveo je sustav HepatoMax™ i HepatoCon™ Media System koji se temelji na proučavanju adherentnih primarnih hepatocita i stromalnih stanica različitih rodova, uključujući ljudske, majmunske, pseće, štakorske i mišje itd. HepatoMax™ System i HepatoCon™ Media System razvijeni su korištenjem adhezivnih primarnih ljudskih stanicahepatocits kao primjer, a oba sustava su postavljena za određivanje aktivnosti i metaboličke stabilnosti specifičnih tipova enzima i povećanja vrijednosti odgovora metabolita lijeka tolbutamida nakon 10 dana i 7 dana za provjeru sustava. Vrijednost odgovora na povećanje metabolita nakon 10 dana te aktivnost i metabolička stabilnost specifičnih tipova enzima nakon 7 dana utvrđeni su za validaciju sustava.
- (1) Dva sustava sustavne kulture validacije lijekova su sljedeća:
IPHASE-HepatoMax™je sustav ko-kulture zamrznutih primarnih ljudskih hepatocita i stromalnih stanica. Primarni ljudski hepatociti su oživljeni i inkubirani sa stromalnim stanicama u mediju HepatoP™ tijekom 3 dana kako bi se započelo ispitivanje davanja lijeka, a metabolizam lijeka je proveden u mediju HepatoDo™ bez seruma, koji je nadopunjen samo lijekom bez promjene medija. Ukupno 4, 72, 168 i 240 sati nakon primjene lijeka određena je dodana vrijednost metabolita lijeka za analizu.
IPHASE-HepatoCon™, s druge strane, sustav je za uzgoj smrznutih adherentnih primarnih ljudskih hepatocita u mediju HepatoCon™. Nakon reanimacije primarne ljudskehepatocits, test primjene lijeka proveden je nakon 3 dana uzgoja samo u mediju HepatoCon™, a naknadno vrijeme primjene, sustav kulture i metodologija testa bili su isti kao oni za sustav HepatoMax™.
U međuvremenu, kako bi se osigurala točnost i rigoroznost rezultata, IPHASE je izvršio srednju kontrolu (bez stanica) i kontrolu stromalnih stanica u isto vrijeme, s tri ponavljanja, a rezultati su pokazali daIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ sustavi su proizveli snažan vršni odgovor metabolita od 3. dana nadalje, te da su oba pokazala jaku stopu metaboličke izmjene.
- (2) Metabolizam lijeka uglavnom ovisi o hepatocituCYP450enzimskog sustava, a njegova se aktivnost može mjeriti radi boljeg ispitivanja.
TheIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ sustavi imaju dobru primjenjivost.
IPHASE je postavio četiri kategorije kontrole medija (bez stanica), HepatoMax™, HepatoCon™ i stromalne stanice. Korištenje primarnog čovjeka koji se pridržava zidahepatocits kao primjer, metabolit povećava vrijednostiCYP1A2, CYP2B6iCYP3A4potvrđeni su 0., 3. i 7. dan nakon togahepatocitoporavak tijekom 3 dana korištenjem finasterida, bupropiona i midazolama kao supstrata. Vrijednosti povećanja metabolita pokazale su da obojeIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ sustavi su pokazali aktivnu aktivnost enzima do 7. dana, dosljedno potičući normalan metabolizam lijeka.
- (3) Osim potvrđivanja aktivnosti enzima, dobra metabolička stabilnost također je važan i neophodan korak u potvrđivanju korisnosti in vitro modela.
IPHASE je postavio tri kategorije HepatoMax™, HepatoCon™ i stromalnih stanica kako bi odredio metaboličku stabilnost tolbutimida tijekom razdoblja od 80 sati koristeći adhezivne primarne ljudske hepatocite kao primjer, koji su primijenjeni 3 dana nakon reanimacije primarnihhepatocits, a rezultati su pokazali da obaIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ oba sustava pokazala su snažnu aktivnost metaboličkog čišćenja unutar najduže vrijednosti vremena ispitivanja.
Ukratko, IPHASE, kao lider u in vitro bio-reagensima, se razvioIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ in vitro modeli koji se temelje na primijenjenom zidu na primarnom čovjeku, majmunu, psu, štakoru i mišuhepatocits i stromalnih stanica različitih rodova, s izvrsnim metaboličkim prometom, aktivnim enzimskim aktivnostima i snažnim metaboličkim aktivnostima čišćenja, koje našim kupcima nude nove izbore za razvoj lijekova s niskim-klirensom, te su nezamjenjiv partner u otkrivanju lijekova! TheIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ in vitro modeli nude izvrsne stope metabolizma, aktivne enzimske aktivnosti i snažne metaboličke aktivnosti čišćenja, pružajući nove mogućnosti korisnicima za razvoj lijekova s niskim-klirensom, te su važan partner u otkrivanju lijekova!
Referenca:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach RS, et al. Nova metoda releja za određivanje niskih-vrijednosti zazora [J]. Metabolizam i dispozicija lijekova, 2012, 40(9): 1860-1865.
Vrijeme objave: 2024-07-19 17:20:41