Поскольку активность ферментов, метаболизирующих лекарственные средства, постепенно снижается с увеличением времени инкубации in vitro, традиционные модели метаболизма in vitro имеют ограничения, такие как короткое время инкубации, низкая метаболическая конверсия и высокий нижний предел обнаружения (нижний количественный предел анализа CLint составляет 2,5 мкл/(мин·106 клеток)), что не позволяет точно предсказать CLint медленно метаболизируемых препаратов.[1]. Между тем,гепатоцитсодержат больше ферментов, необходимых для реакций окисления, восстановления, гидролиза и димеризации, по сравнению смикросомы печени, а в системах in vitro многие новые модели, как правило, оптимизируются на основегепатоцит системы и далее имитировать среду in vivo, чтобы продлить сохранение активности фермента вгепатоцитс, а удлинение времени инкубации дает возможность контролировать достаточную метаболическую трансформацию медленно метаболизирующихся препаратов.[1,2].
В связи с этим компания IPHASE, являющаяся лидером в области биологических реагентов для исследований in vitro, разработала системы HepatoMax™ и HepatoCon™ Media System, основанные на изучении прикрепившихся первичных гепатоцитов и стромальных клеток различных родов, включая человека, обезьяну, собаку, крысу, мышь и т. д. Системы HepatoMax™ и HepatoCon™ Media System были разработаны с использованием прикрепившихся первичных человеческих сред.гепатоцитВ качестве примера обе системы были настроены для определения активности и метаболической стабильности конкретных типов ферментов, а также увеличения значения реакции метаболитов препарата толбутамид через 10 дней и 7 дней для проверки систем. Для проверки систем определяли величину реакции увеличения метаболитов через 10 дней, а также активность и метаболическую стабильность конкретных типов ферментов через 7 дней.
- (1) Два систематических процесса культуры валидации лекарственных средств заключаются в следующем:
IPHASE-ГепатоМакс™представляет собой систему совместного культивирования первичных гепатоцитов человека с замороженными стенками и стромальных клеток. Первичные гепатоциты человека реанимировали и инкубировали со стромальными клетками в среде HepatoP™ в течение 3 дней для начала анализа введения лекарственного средства, а метаболизм лекарственного средства осуществляли в бессывороточной среде HepatoDo™, которую пополняли только лекарственным средством без замены среды. Всего через 4, 72, 168 и 240 часов после введения лекарственного средства для анализа определяли добавленную стоимость метаболитов лекарственного средства.
IPHASE-ГепатоКон™, с другой стороны, представляет собой систему для культивирования замороженных прикрепившихся первичных гепатоцитов человека в среде HepatoCon™. После реанимации основного человекагепатоцитs, анализ введения лекарственного средства проводили после 3 дней культивирования только в среде HepatoCon™, а последующее время введения, культуральная система и методология анализа были такими же, как и для системы HepatoMax™.
Между тем, чтобы гарантировать точность и строгость результатов, IPHASE выполнила контроль среды (без клеток) и контроль стромальных клеток одновременно в трех повторностях, и результаты показали, чтоIPHASE-ГепатоМакс™ иIPHASE-ГепатоКон™ системы давали сильный пиковый метаболитный ответ, начиная с 3-го дня, и что они обе демонстрировали высокую скорость метаболического обмена.
- (2) Метаболизм лекарств в основном зависит от гепатоцитов.CYP450ферментной системы, и ее активность можно измерить для лучшего изучения.
IPHASE-ГепатоМакс™ иIPHASE-ГепатоКон™ системы имеют хорошую применимость.
IPHASE установил четыре категории контроля среды (без клеток), HepatoMax™, HepatoCon™ и стромальных клеток. Использование стены-приверженца основного человекагепатоцитНапример, метаболит увеличивает значенияCYP1A2, CYP2B6иCYP3A4были проверены на 0, 3 и 7 день послегепатоцитвосстановление в течение 3 дней с использованием финастерида, бупропиона и мидазолама в качестве субстратов соответственно. Значения увеличения метаболитов показали, что обаIPHASE-ГепатоМакс™ иIPHASE-ГепатоКон™ системы показали активную ферментативную активность к 7 дню, последовательно способствуя нормальному метаболизму лекарств.
- (3) Помимо подтверждения активности фермента, хорошая метаболическая стабильность также является важным и незаменимым шагом в подтверждении полезности моделей in vitro.
IPHASE установил три категории HepatoMax™, HepatoCon™ и стромальных клеток для определения метаболической стабильности толбутимида в течение 80 часов, используя в качестве примера прикрепившиеся первичные гепатоциты человека, которые вводили через 3 дня после реанимации первичногогепатоцитs, и результаты показали, что обаIPHASE-ГепатоМакс™ иIPHASE-ГепатоКон™ обе системы показали высокую активность метаболического клиренса в течение самого длительного времени анализа.
Таким образом, компания IPHASE, являясь лидером в области биореагентов in vitro, разработалаИФАЗА ГепатоМакс™ иIPHASE ГепатоКон™ модели in vitro, основанные на настенно-прикладных первичных моделях человека, обезьяны, собаки, крысы и мышигепатоцитs и стромальные клетки различных родов, с отличным метаболическим обменом, активной ферментативной активностью и мощным метаболическим клиренсом, которые предлагают нашим клиентам новые возможности для разработки лекарств с низким клиренсом и являются незаменимым партнером для открытия новых лекарств!ИФАЗА ГепатоМакс™ иIPHASE ГепатоКон™ Модели in vitro обеспечивают превосходную скорость метаболического оборота, активную активность ферментов и высокую активность метаболического клиренса, предоставляя клиентам новые возможности для разработки лекарств с низким клиренсом и являясь важным партнером в разработке новых лекарств!
Ссылка:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Ди Л., Трапа П., Обах Р.С. и др. Новый релейный метод для определения значений низкого зазора[J]. Метаболизм и распределение лекарств, 2012, 40(9): 1860-1865.
Время публикации: 2024-07-19 17:20:41