Eftersom de läkemedelsmetaboliserande enzymaktiviteterna gradvis minskar med förlängningen av in vitro-inkubationstiden, har traditionella in vitro-metabolismmodeller begränsningar som kort inkubationstid, låg metabolisk omvandling och hög nedre detektionsgräns (den kvantitativa nedre gränsen för CLint-analysen är 2,5 μL /(min·106 celler)), vilket inte kan förutsäga CL-läkemedel exakt för långsamt metaboliserade läkemedel.[1]. Under tiden,hepatocyts har fler enzymer som krävs för oxidation, reduktion, hydrolys och dimeriseringsreaktioner jämfört medlevermikrosomer, och in vitro-system tenderar många nya modeller att vara optimerade baserat påhepatocyt system och ytterligare efterlikna in vivo-miljön för att förlänga retentionen av enzymaktivitet ihepatocyts, och förlängningen av inkubationstiden ger möjlighet att övervaka tillräcklig metabolisk transformation av långsamt metaboliserande läkemedel[1,2].
Med tanke på detta har IPHASE, som en ledare inom biologiska reagenser för in vitro-forskning, banat väg för HepatoMax™ System och HepatoCon™ Media System baserat på studier av vidhäftande primära hepatocyter och stromaceller av olika släkten, inklusive människa, apa, hund, råtta och mus, etc.hepatocyts som ett exempel, och båda systemen sattes upp för bestämning av aktiviteten och metabolisk stabilitet för specifika enzymtyper och ökningen av responsvärdet för metaboliter av läkemedlet tolbutamid efter 10 dagar och 7 dagar för att verifiera systemen. Metaboliter ökade responsvärdet efter 10 dagar och aktivitet och metabolisk stabilitet för specifika enzymtyper efter 7 dagar bestämdes för att validera systemen.
- (1) De två systematiska läkemedelsvalideringskulturprocesserna är följande:
IPHASE-HepatoMax™är ett samodlingssystem av frusna väggar av primära humana hepatocyter och stromaceller. Primära humana hepatocyter återupplivades och inkuberades med stromaceller i HepatoP™-medium i 3 dagar för att starta läkemedelsadministrationsanalysen, och metabolismen av läkemedlet utfördes i serum-fritt HepatoDo™-medium, som endast fylldes på med läkemedlet utan att mediumet ändrades. Totalt 4, 72, 168 och 240 timmar efter läkemedelsadministrering bestämdes förädlingsvärdet för läkemedelsmetaboliter för analys.
IPHASE-HepatoCon™å andra sidan är ett system för odling av frusna vidhäftande primära humana hepatocyter i HepatoCon™-medium. Efter att ha återupplivat den primära människanhepatocyts utfördes läkemedelsadministrationsanalysen efter 3 dagars odling i enbart HepatoCon™-medium, och den efterföljande administreringstiden var odlingssystemet och analysmetoden desamma som för HepatoMax™-systemet.
Under tiden, för att säkerställa noggrannheten och noggrannheten hos resultaten, utförde IPHASE en mediumkontroll (cell-fri) och en stromacellkontroll samtidigt, med tre replikationer, och resultaten visade attIPHASE-HepatoMax™ ochIPHASE-HepatoCon™ system producerade en stark toppmetabolitrespons från dag 3 och framåt, och att de båda visade en stark metabolisk omsättningshastighet.
- (2) Läkemedelsmetabolismen är huvudsakligen beroende av hepatocytenCYP450enzymsystemet, och dess aktivitet kan mätas för att bättre undersöka.
DenIPHASE-HepatoMax™ ochIPHASE-HepatoCon™ system har god tillämpbarhet.
IPHASE satte upp fyra kategorier av mediumkontroll (inga celler), HepatoMax™, HepatoCon™ och stromaceller. Använder vägghäftande primär människahepatocyts som ett exempel, metaboliten öka värden påCYP1A2, CYP2B6ochCYP3A4verifierades på dag 0, 3 och 7 efterhepatocytåterhämtning under 3 dagar med finasterid, bupropion respektive midazolam som substrat. Metabolitökningsvärden visade att bådaIPHASE-HepatoMax™ ochIPHASE-HepatoCon™ system visade aktiv enzymaktivitet på dag 7, vilket konsekvent främjade normal läkemedelsmetabolism.
- (3) Förutom valideringen av enzymaktivitet är god metabolisk stabilitet också ett viktigt och oumbärligt steg för att validera användbarheten av in vitro-modeller.
IPHASE satte upp tre kategorier av HepatoMax™, HepatoCon™ och stromaceller för att bestämma den metaboliska stabiliteten av Tolbutimid under en period av 80 timmar med hjälp av adherenta primära humana hepatocyter som ett exempel, som administrerades 3 dagar efter återupplivning av primärahepatocyts, och resultaten visade att bådeIPHASE-HepatoMax™ ochIPHASE-HepatoCon™ båda systemen visade robust metabolisk clearance-aktivitet inom det längsta värdet av analystiden.
Sammanfattningsvis har IPHASE, som ledande inom bio-reagenser in vitro, utvecklatsIPHASE HepatoMax™ ochIPHASE HepatoCon™ in vitro-modeller baserade på vägg-applicerad primär människa, apa, hund, råtta och mushepatocyts och stromaceller av olika släkten, med utmärkt metabolisk omsättning, aktiva enzymaktiviteter och kraftfulla metaboliska clearance-aktiviteter, som erbjuder nya val för våra kunder att utveckla låg-clearance läkemedel, och är en oumbärlig partner för att förverkliga läkemedelsupptäckten! DenIPHASE HepatoMax™ ochIPHASE HepatoCon™ in vitro-modeller erbjuder utmärkta metaboliska omsättningshastigheter, aktiva enzymaktiviteter och starka metaboliska clearance-aktiviteter, ger nya möjligheter för kunder att utveckla låg-clearance-läkemedel och är en viktig partner i läkemedelsupptäckten!
Referens:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach RS, et al. En ny relämetod för att bestämma låga-clearance-värden[J]. Läkemedelsmetabolism och disposition, 2012, 40(9): 1860-1865.
Inläggstid: 2024-07-19 17:20:41