Tā kā zāles metabolizējošo enzīmu aktivitātes pakāpeniski samazinās, pagarinot in vitro inkubācijas laiku, tradicionālajiem in vitro metabolisma modeļiem ir ierobežojumi, piemēram, īss inkubācijas laiks, zema metaboliskā konversija un augsta zemākā noteikšanas robeža (CLint testa kvantitatīvā apakšējā robeža ir 2,5 μL /( min·106 šūnas)), kas nevar precīzi paredzēt lēni metabolizēto zāļu CLint.[1]. Tikmērhepatocītus ir vairāk enzīmu, kas nepieciešami oksidācijas, reducēšanas, hidrolīzes un dimerizācijas reakcijām, salīdzinot araknu mikrosomas, un in vitro sistēmās daudzi jauni modeļi tiek optimizēti, pamatojoties uzhepatocītu sistēmu un tālāk imitēt in vivo vidi, lai paildzinātu enzīmu aktivitātes saglabāšanoshepatocītus, un inkubācijas laika pagarināšana nodrošina iespēju uzraudzīt lēni metabolizējošo zāļu pietiekamu metabolisko transformāciju[1,2].
Ņemot to vērā, IPHASE kā līderis bioloģisko reaģentu jomā in vitro pētījumiem ir bijis HepatoMax™ System un HepatoCon™ Media System pionieris, pamatojoties uz dažādu ģinšu, tostarp cilvēku, pērtiķu, suņu, žurku un peles utt., pielipušo primāro hepatocītu un stromas šūnu izpēti.hepatocītus kā piemērs, un abas sistēmas tika izveidotas, lai noteiktu konkrētu enzīmu tipu aktivitāti un vielmaiņas stabilitāti, kā arī zāļu tolbutamīda metabolītu reakcijas vērtības palielināšanos pēc 10 dienām un 7 dienām, lai pārbaudītu sistēmas. Lai apstiprinātu sistēmas, tika noteikta metabolītu palielināšanās reakcijas vērtība pēc 10 dienām un noteiktu enzīmu tipu aktivitāte un vielmaiņas stabilitāte pēc 7 dienām.
- (1) Divi sistemātiski zāļu validācijas kultūras procesi ir šādi:
IPHASE-HepatoMax™ir sasaldētu primāro cilvēka hepatocītu un stromas šūnu kopkultūras sistēma. Primārie cilvēka hepatocīti tika reanimēti un inkubēti ar stromas šūnām HepatoP™ barotnē 3 dienas, lai sāktu zāļu ievadīšanas testu, un zāļu metabolisms tika veikts serumu nesaturošā HepatoDo™ barotnē, kas tika papildināta tikai ar zālēm, nemainot barotni. Kopumā 4, 72, 168 un 240 stundas pēc zāļu ievadīšanas analīzei tika noteikta zāļu metabolītu pievienotā vērtība.
IPHASE-HepatoCon™, no otras puses, ir sistēma sasaldētu pielipušo primāro cilvēka hepatocītu kultivēšanai HepatoCon™ barotnē. Pēc primārā cilvēka reanimācijashepatocītus, zāļu ievadīšanas tests tika veikts pēc 3 dienu kultivēšanas tikai HepatoCon™ barotnē, un turpmākais ievadīšanas laiks, kultivēšanas sistēma un testa metodoloģija bija tāda pati kā HepatoMax™ sistēmai.
Tikmēr, lai nodrošinātu rezultātu precizitāti un precizitāti, IPHASE vienlaikus veica barotnes kontroli (bez šūnām) un stromas šūnu kontroli ar trīs atkārtojumiem, un rezultāti parādīja, kaIPHASE-HepatoMax™ unIPHASE-HepatoCon™ sistēmas radīja spēcīgu maksimālo metabolīta reakciju no 3. dienas un ka tās abas uzrādīja spēcīgu vielmaiņas aprites ātrumu.
- (2) Zāļu metabolisms galvenokārt ir atkarīgs no hepatocītiemCYP450enzīmu sistēmu, un tās aktivitāti var izmērīt, lai labāk pārbaudītu.
TheIPHASE-HepatoMax™ unIPHASE-HepatoCon™ sistēmām ir laba pielietojamība.
IPHASE iestatīja četras barotnes kontroles kategorijas (bez šūnām), HepatoMax™, HepatoCon™ un stromas šūnas. Izmantojot sienu-adherent primāro cilvēkuhepatocītuPiemēram, metabolīts palielina vērtībasCYP1A2, CYP2B6unCYP3A4tika pārbaudīti 0., 3. un 7. dienā pēc tamhepatocītuatgūšana 3 dienas, izmantojot attiecīgi finasterīdu, bupropionu un midazolāmu kā substrātus. Metabolītu pieauguma vērtības parādīja, ka ganIPHASE-HepatoMax™ unIPHASE-HepatoCon™ sistēmas uzrādīja aktīvu enzīmu aktivitāti līdz 7. dienai, konsekventi veicinot normālu zāļu metabolismu.
- (3) Papildus fermentu aktivitātes apstiprināšanai laba vielmaiņas stabilitāte ir arī svarīgs un neaizstājams solis in vitro modeļu lietderības apstiprināšanai.
IPHASE izveidoja trīs HepatoMax™, HepatoCon™ un stromas šūnu kategorijas, lai noteiktu tolbutimīda vielmaiņas stabilitāti 80 stundu periodā, kā piemēru izmantojot pielipušos primāros cilvēka hepatocītus, kas tika ievadīti 3 dienas pēc primārās reanimācijas.hepatocītus, un rezultāti parādīja, ka ganIPHASE-HepatoMax™ unIPHASE-HepatoCon™ abas sistēmas uzrādīja spēcīgu metabolisma klīrensa aktivitāti garākajā testa laika vērtībā.
Rezumējot, IPHASE kā in vitro bioreaģentu līderis ir attīstījiesIPHASE HepatoMax™ unIPHASE HepatoCon™ in vitro modeļi, kuru pamatā ir sienas - primāri lietoti cilvēki, pērtiķi, suņi, žurkas un peleshepatocītus un dažādu ģinšu stromas šūnas ar izcilu vielmaiņas apriti, aktīvām enzīmu aktivitātēm un spēcīgām vielmaiņas attīrīšanas aktivitātēm, kas piedāvā jaunas izvēles iespējas mūsu klientiem izstrādāt zemas klīrensa zāles un ir neaizstājams partneris zāļu atklāšanai! TheIPHASE HepatoMax™ unIPHASE HepatoCon™ in vitro modeļi piedāvā izcilus vielmaiņas aprites ātrumus, aktīvas enzīmu aktivitātes un spēcīgas vielmaiņas klīrensa aktivitātes, nodrošinot klientiem jaunas iespējas izstrādāt zāles ar zemu klīrensu, un tie ir nozīmīgs partneris zāļu atklāšanā!
Atsauce:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S u.c. Jauna releja metode zemo klīrensa vērtību noteikšanai[J]. Zāļu metabolisms un dispozīcija, 2012, 40(9): 1860-1865.
Ieraksta laiks: 2024-07-19 17:20:41