Omdat de activiteit van het geneesmiddelmetaboliserende enzym geleidelijk afneemt met de verlenging van de in vitro incubatietijd, hebben traditionele in vitro metabolismemodellen beperkingen zoals een korte incubatietijd, een lage metabolische conversie en een hoge ondergrens voor detectie (de kwantitatieve ondergrens van de CLint-test is 2,5 μl /(min.106 cellen)), waardoor CLint van langzaam gemetaboliseerde geneesmiddelen niet nauwkeurig kan worden voorspeld.[1]. Ondertussen,hepatocyts hebben meer enzymen nodig voor oxidatie-, reductie-, hydrolyse- en dimerisatiereacties vergeleken metlevermicrosomen, en in in vitro-systemen hebben veel nieuwe modellen de neiging om te worden geoptimaliseerd op basis van dehepatocyt systeem en bootsen verder de in vivo omgeving na om het behoud van enzymactiviteit in te verlengenhepatocyts, en de verlenging van de incubatietijd biedt de mogelijkheid om voldoende metabolische transformatie van langzaam metaboliserende geneesmiddelen te monitoren[1,2].
Met het oog hierop heeft IPHASE, als leider op het gebied van biologische reagentia voor in vitro onderzoek, pionierswerk verricht met het HepatoMax™-systeem en het HepatoCon™-mediasysteem, gebaseerd op de studie van hechtende primaire hepatocyten en stromale cellen van verschillende geslachten, waaronder mensen, apen, honden, ratten en muizen, enz. Het HepatoMax™-systeem en HepatoCon™-mediasysteem zijn ontwikkeld met behulp van de hechtende primaire menselijkehepatocyts als voorbeeld, en beide systemen waren opgezet voor het bepalen van de activiteit en metabolische stabiliteit van specifieke enzymtypen en de toename van de responswaarde van metabolieten van het medicijn tolbutamide na 10 dagen en 7 dagen om de systemen te verifiëren. Metaboliet verhoogt de responswaarde na 10 dagen en de activiteit en metabolische stabiliteit van specifieke enzymtypen na 7 dagen werden bepaald om de systemen te valideren.
- (1)De twee systematische cultuurprocessen voor medicijnvalidatie zijn als volgt:
IPHASE-HepatoMax™is een cocultuursysteem van primaire menselijke hepatocyten en stromacellen met bevroren wanden. Primaire menselijke hepatocyten werden gereanimeerd en gedurende 3 dagen geïncubeerd met stromale cellen in HepatoP™-medium om de test voor medicijntoediening te starten, en het metabolisme van het medicijn werd uitgevoerd in serum-vrij HepatoDo™-medium, dat alleen met het medicijn werd aangevuld zonder het medium te veranderen. In totaal 4, 72, 168 en 240 uur na toediening van het geneesmiddel werd de toegevoegde waarde van de metabolieten van het geneesmiddel bepaald voor analyse.
IPHASE-HepatoCon™aan de andere kant is het een systeem voor het kweken van bevroren hechtende primaire menselijke hepatocyten in HepatoCon™-medium. Na het reanimeren van de primaire menshepatocytVervolgens werd de geneesmiddeltoedieningstest uitgevoerd na 3 dagen kweken in alleen HepatoCon™-medium, en het daaropvolgende tijdstip van toediening waren het kweeksysteem en de testmethodologie dezelfde als die van het HepatoMax™-systeem.
Om de nauwkeurigheid en nauwkeurigheid van de resultaten te garanderen, voerde IPHASE intussen tegelijkertijd een mediumcontrole (cel-vrij) en een stromacelcontrole uit, met drie replicaties, en de resultaten toonden aan dat deIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ systemen produceerden vanaf dag 3 een sterke piekmetabolietrespons, en dat ze allebei een sterke metabolische omloopsnelheid vertoonden.
- (2) Het metabolisme van geneesmiddelen is voornamelijk afhankelijk van de hepatocytCYP450enzymsysteem, en de activiteit ervan kan worden gemeten om beter te onderzoeken.
DeIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ systemen zijn goed toepasbaar.
IPHASE heeft vier categorieën mediumcontrole (geen cellen), HepatoMax™, HepatoCon™ en stromale cellen opgezet. Met behulp van muur-aanhangende primaire menshepatocytZo verhoogt de metaboliet bijvoorbeeld de waarden vanCYP1A2, CYP2B6enCYP3A4werden geverifieerd op dag 0, 3 en 7 ernahepatocytherstel gedurende 3 dagen met respectievelijk finasteride, bupropion en midazolam als substraten. Metabolietstijgingswaarden toonden aan dat beideIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ systemen vertoonden actieve enzymactiviteit op dag 7, waardoor het normale geneesmiddelmetabolisme consequent werd bevorderd.
- (3) Naast de validatie van enzymactiviteit is een goede metabolische stabiliteit ook een belangrijke en onmisbare stap bij het valideren van de bruikbaarheid van in vitro modellen.
IPHASE heeft drie categorieën HepatoMax™-, HepatoCon™- en stromale cellen opgezet om de metabolische stabiliteit van tolbutimide over een periode van 80 uur te bepalen, waarbij bijvoorbeeld hechtende primaire menselijke hepatocyten werden gebruikt, die drie dagen na reanimatie van primaire hepatocyten werden toegediend.hepatocyts, en de resultaten toonden aan dat zowel deIPHASE-HepatoMax™ enIPHASE-HepatoCon™ systemen vertoonden beide een robuuste metabolische klaringsactiviteit binnen de langste waarde van de testtijd.
Samenvattend heeft IPHASE zich ontwikkeld als leider op het gebied van in vitro bio-reagentiaIPHASE HepatoMax™ enIPHASE HepatoCon™ in vitro modellen gebaseerd op op de muur toegepaste primaire mens, aap, hond, rat en muishepatocyts en stromale cellen van verschillende geslachten, met uitstekende metabolische omzet, actieve enzymactiviteiten en krachtige metabolische klaringsactiviteiten, die nieuwe keuzes bieden voor onze klanten om medicijnen met lage klaring te ontwikkelen, en een onmisbare partner zijn om de ontdekking van geneesmiddelen te realiseren! DeIPHASE HepatoMax™ enIPHASE HepatoCon™ in vitro-modellen bieden uitstekende metabolische omzettingssnelheden, actieve enzymactiviteiten en sterke metabolische klaringsactiviteiten, waardoor klanten nieuwe mogelijkheden krijgen om geneesmiddelen met een lage klaring te ontwikkelen, en ze zijn een belangrijke partner bij het ontdekken van geneesmiddelen!
Referentie:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Een nieuwe relaismethode voor het bepalen van lage -klaringswaarden[J]. Geneesmiddelmetabolisme en dispositie, 2012, 40(9): 1860-1865.
Posttijd: 2024-07-19 17:20:41