Atès que les activitats de l'enzim metabolitzador de fàrmacs disminueixen gradualment amb la prolongació del temps d'incubació in vitro, els models tradicionals de metabolisme in vitro tenen limitacions com ara un temps d'incubació curt, una conversió metabòlica baixa i un límit inferior de detecció alt (el límit inferior quantitatiu del test CLint és de 2,5 μL /(min·106 cèl·lules)), que no poden predir amb precisió el CLint dels fàrmacs metabolitzats lentament.[1]. Mentrestant,hepatòcits tenen més enzims necessaris per a les reaccions d'oxidació, reducció, hidròlisi i dimerització en comparació ambmicrosomes hepàtics, i en sistemes in vitro, molts models nous tendeixen a optimitzar-se basant-se en elhepatòcit sistema i imitar encara més l'entorn in vivo per allargar la retenció de l'activitat enzimàticahepatòcits, i la prolongació del temps d'incubació ofereix la possibilitat de controlar la transformació metabòlica suficient de fàrmacs de metabolització lenta[1,2].
En vista d'això, IPHASE, com a líder en reactius biològics per a la investigació in vitro, ha estat pionera en el sistema HepatoMax™ i el sistema HepatoCon™ Media basat en l'estudi d'hepatòcits primaris adherents i cèl·lules estromals de diversos gèneres, inclosos humans, micos, canins, rata i ratolí, etc.hepatòcits com a exemple, i ambdós sistemes es van configurar per a la determinació de l'activitat i l'estabilitat metabòlica de tipus d'enzims específics i l'augment del valor de resposta dels metabòlits del fàrmac tolbutamida als 10 dies i 7 dies per verificar els sistemes. El valor de resposta del metabòlit augmenta als 10 dies i es va determinar l'activitat i l'estabilitat metabòlica de tipus d'enzims específics als 7 dies per validar els sistemes.
- (1) Els dos processos sistemàtics de cultiu de validació de fàrmacs són els següents:
IPHASE-HepatoMax™és un sistema de co-cultiu d'hepatòcits humans primaris de paret congelada i cèl·lules estromals. Els hepatòcits humans primaris es van reanimar i incubar amb cèl·lules estromals en medi HepatoP ™ durant 3 dies per iniciar l'assaig d'administració de fàrmacs, i el metabolisme del fàrmac es va dur a terme en medi HepatoDo ™ lliure de sèrum, que només es va reposar amb el fàrmac sense canviar el medi. Un total de 4, 72, 168 i 240 hores després de l'administració del fàrmac, es va determinar el valor afegit dels metabòlits del fàrmac per a l'anàlisi.
IPHASE-HepatoCon™, d'altra banda, és un sistema per cultivar hepatòcits humans primaris adherents congelats en medi HepatoCon™. Després de reanimar l'humà principalhepatòcits, l'assaig d'administració de fàrmacs es va realitzar després de 3 dies de cultiu només en medi HepatoCon™, i el temps posterior d'administració, el sistema de cultiu i la metodologia d'assaig van ser els mateixos que els del sistema HepatoMax™.
Mentrestant, per garantir l'exactitud i el rigor dels resultats, IPHASE va realitzar un control mitjà (cell-free) i un control de cèl·lules estromals al mateix temps, amb tres rèpliques, i els resultats van mostrar que elIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ Els sistemes van produir una forta resposta metabòlica màxima a partir del dia 3 i que tots dos van mostrar una forta taxa de rotació metabòlica.
- (2) El metabolisme dels fàrmacs depèn principalment de l'hepatòcitCYP450sistema enzimàtic i la seva activitat es pot mesurar per examinar millor.
ElIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ Els sistemes tenen una bona aplicabilitat.
IPHASE va establir quatre categories de control mitjà (sense cèl·lules), HepatoMax™, HepatoCon™ i cèl·lules estromals. Utilitzant un ésser humà primari adherent a la parethepatòcits per exemple, el metabòlit augmenta els valors deCYP1A2, CYP2B6iCYP3A4es van verificar els dies 0, 3 i 7 posteriorshepatòcitrecuperació durant 3 dies utilitzant finasterida, bupropió i midazolam com a substrats, respectivament. Els valors d'augment del metabolit van mostrar que tots dosIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ Els sistemes van mostrar activitat enzimàtica activa el dia 7, promovent constantment el metabolisme normal dels fàrmacs.
- (3) A més de la validació de l'activitat enzimàtica, una bona estabilitat metabòlica també és un pas important i indispensable per validar la utilitat dels models in vitro.
IPHASE va establir tres categories de HepatoMax™, HepatoCon™ i cèl·lules estromals per determinar l'estabilitat metabòlica de la tolbutimida durant un període de 80 hores utilitzant com a exemple hepatòcits humans primaris adherents, que es van administrar 3 dies després de la reanimació primària.hepatòcits, i els resultats van mostrar que tant elIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ tots dos sistemes van mostrar una activitat d'eliminació metabòlica robusta dins del valor més llarg del temps d'assaig.
En resum, IPHASE, com a líder en bio-reactius in vitro, s'ha desenvolupatIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ models in vitro basats en la paret primària aplicada humana, mico, caní, rata i ratolíhepatòcits i cèl·lules estromals de diversos gèneres, amb una excel·lent rotació metabòlica, activitats enzimàtiques actives i potents activitats d'eliminació metabòlica, que ofereixen noves opcions als nostres clients per desenvolupar fàrmacs de baixa eliminació i són un soci indispensable per realitzar el descobriment de fàrmacs! ElIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ Els models in vitro ofereixen excel·lents taxes de rotació metabòlica, activitats enzimàtiques actives i fortes activitats d'eliminació metabòlica, oferint noves opcions perquè els clients desenvolupin fàrmacs de baixa eliminació i són un soci important en el descobriment de fàrmacs!
Referència:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Un nou mètode de relé per a la determinació de valors d'espai lliure[J]. Metabolisme i disposició de drogues, 2012, 40(9): 1860-1865.
Hora de publicació: 2024-07-19 17:20:41