Preparatni metabolizatsiya qiluvchi ferment faolligi in vitro inkubatsiya vaqtining uzayishi bilan asta-sekin kamayib borayotganligi sababli, an'anaviy in vitro metabolizm modellari qisqa inkubatsiya vaqti, past metabolik konvertatsiya va yuqori pastki aniqlash chegarasi kabi cheklovlarga ega (CLint tahlilining miqdoriy pastki chegarasi 2,5 mkL / (min · 106 hujayraning metabollanishini sekinlik bilan bashorat qila olmaydi))[1]. Ayni paytda,gepatotsitbilan solishtirganda oksidlanish, qaytarilish, gidroliz va dimerizatsiya reaktsiyalari uchun zarur bo'lgan ko'proq fermentlarga ega.jigar mikrosomalari, va in vitro tizimlarida ko'plab yangi modellar asosan optimallashtiriladigepatotsit tizimda ferment faolligini saqlashni uzaytirish uchun in vivo muhitga taqlid qiladigepatotsits va inkubatsiya vaqtining uzayishi sekin metabolizatsiya qiluvchi dorilarning etarli metabolik transformatsiyasini kuzatish imkoniyatini beradi.[1,2].
Shularni hisobga olib, IPHASE in vitro tadqiqotlari uchun biologik reagentlar bo‘yicha yetakchi sifatida turli avlodlar, jumladan, odam, maymun, it, kalamush va sichqoncha va boshqalarni birlamchi birlamchi gepatotsitlar va stromal hujayralarini o‘rganishga asoslangan HepatoMax™ tizimi va HepatoCon™ Media tizimiga kashshof bo‘ldi.gepatotsits misol sifatida va ikkala tizim ham tizimlarni tekshirish uchun 10 kun va 7 kun ichida o'ziga xos ferment turlarining faolligi va metabolik barqarorligini va dori tolbutamid metabolitlarining javob qiymatini oshirish uchun o'rnatildi. Tizimlarni tekshirish uchun 10 kunlik metabolitning javob qiymati va 7 kun ichida o'ziga xos ferment turlarining faolligi va metabolik barqarorligi aniqlandi.
- (1) Dori vositalarini tekshirish madaniyatining ikkita tizimli jarayoni quyidagilardan iborat:
IPHASE-HepatoMax™muzlatilgan devorli birlamchi inson gepatotsitlari va stroma hujayralarining ko-kultura tizimidir. Birlamchi inson gepatotsitlari reanimatsiya qilindi va stromal hujayralar bilan HepatoP™ muhitida 3 kun davomida inkubatsiya qilindi va preparatni qo'llash tahlilini boshlashdi va preparatning metabolizmi sarum-erkin HepatoDo™ muhitida amalga oshirildi, u vositani o'zgartirmasdan faqat preparat bilan to'ldiriladi. Preparat kiritilgandan keyin jami 4, 72, 168 va 240 soat o'tgach, tahlil qilish uchun dori metabolitlarining qo'shilgan qiymati aniqlandi.
IPHASE-HepatoCon™, boshqa tomondan, HepatoCon™ muhitida muzlatilgan birlamchi inson gepatotsitlarini etishtirish tizimi. Boshlang'ich insonni reanimatsiya qilgandan keyingepatotsits, preparatni qo'llash tahlili faqat HepatoCon™ muhitida 3 kunlik kulturadan so'ng amalga oshirildi va keyingi kiritish vaqti, madaniyat tizimi va tahlil metodologiyasi HepatoMax™ tizimi bilan bir xil edi.
Shu bilan birga, natijalarning aniqligi va qat'iyligini ta'minlash uchun IPHASE bir vaqtning o'zida uchta replikatsiya bilan o'rta nazorat (hujayra - bepul) va stromal hujayra nazoratini amalga oshirdi va natijalar shuni ko'rsatdiki,IPHASE-HepatoMax™ vaIPHASE-HepatoCon™ Tizimlar 3-kundan boshlab kuchli yuqori metabolit reaktsiyasini ishlab chiqardi va ikkalasi ham kuchli metabolik aylanish tezligini ko'rsatdi.
- (2) Giyohvand moddalar almashinuvi asosan gepatotsitga bog'liq450 CYPferment tizimi va uning faolligini yaxshiroq tekshirish uchun o'lchash mumkin.
TheIPHASE-HepatoMax™ vaIPHASE-HepatoCon™ tizimlari yaxshi qo'llanilishi mumkin.
IPHASE o'rta nazoratning to'rtta toifasini (hujayrasiz), HepatoMax™, HepatoCon™ va stromal hujayralarni o'rnatdi. Devordan foydalanish-yopishqoq asosiy insongepatotsits misol sifatida, ning metabolit ortishi qiymatlariCYP1A2, CYP2B6vaCYP3A40, 3 va 7 kundan keyin tekshirildigepatotsitmos ravishda finasterid, bupropion va midazolam yordamida substrat sifatida 3 kun davomida tiklanish. Metabolitlarni ko'paytirish qiymatlari ikkalasini ham ko'rsatdiIPHASE-HepatoMax™ vaIPHASE-HepatoCon™ Tizimlar 7-kunga kelib faol ferment faolligini ko'rsatdi va doimiy ravishda normal dori almashinuvini targ'ib qildi.
- (3) Ferment faolligini tekshirishdan tashqari, yaxshi metabolik barqarorlik ham in vitro modellarining foydaliligini tasdiqlashda muhim va ajralmas qadamdir.
IPHASE tolbutimidning 80 soat davomida metabolik barqarorligini aniqlash uchun HepatoMax™, HepatoCon™ va stromal hujayralarning uchta toifasini o'rnatdi, ular birlamchi inson gepatotsitlarini birlamchi reanimatsiya qilinganidan keyin 3 kun o'tgach kiritildi.gepatotsits va natijalar shuni ko'rsatdiki, ikkalasi hamIPHASE-HepatoMax™ vaIPHASE-HepatoCon™ ikkala tizim ham tahlil vaqtining eng uzoq qiymatida kuchli metabolik tozalash faolligini ko'rsatdi.
Xulosa qilib aytganda, IPHASE in vitro bio-reagentlarida yetakchi sifatida ishlab chiqilganIPHASE HepatoMax™ vaIPHASE HepatoCon™ devor-qo'llaniladigan asosiy odam, maymun, it, kalamush va sichqonchaga asoslangan in vitro modellarigepatotsita'lo darajada metabolik aylanmasi, faol ferment faolligi va kuchli metabolik tozalash faolligi bilan har xil nasldagi s va stromal hujayralar mijozlarimizga past-klirensiyali dori-darmonlarni ishlab chiqishda yangi tanlovlarni taklif qiladi va dori kashfiyotida ajralmas hamkordir! TheIPHASE HepatoMax™ vaIPHASE HepatoCon™ in vitro modellari mukammal metabolik aylanma sur'atlarini, faol ferment faolligini va kuchli metabolik tozalash faoliyatini taklif qiladi, mijozlarga past-klirensiyali dori-darmonlarni ishlab chiqish uchun yangi imkoniyatlar taqdim etadi va dori-darmonlarni kashf qilishda muhim hamkor hisoblanadi!
Malumot:
[1] lēngčiči,čičiči,čičiči,čičičiči,či. língíngíngíngíngíngíngínjínī[J].jíngíngíngíngíngjínjíngjín, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S va boshqalar. Past-tozalash qiymatlarini [J] aniqlashning yangi o'rni usuli. Dori metabolizmi va joylashuvi, 2012, 40 (9): 1860-1865.
Xabar vaqti: 2024-07-19 17:20:41