Δεδομένου ότι οι δραστηριότητες των ενζύμων μεταβολισμού του φαρμάκου μειώνονται σταδιακά με την παράταση του χρόνου επώασης in vitro, τα παραδοσιακά μοντέλα μεταβολισμού in vitro έχουν περιορισμούς όπως σύντομο χρόνο επώασης, χαμηλή μεταβολική μετατροπή και υψηλό κατώτερο όριο ανίχνευσης (το ποσοτικό κατώτερο όριο της ανάλυσης CLint είναι 2,5 μL /(min·106 κύτταρα) που δεν μπορούν να προσδιορίσουν με ακρίβεια τα φάρμακα που μεταβολίζονται αργά.[1]. Εν τω μεταξύ,ηπατοκύτταροs έχουν περισσότερα ένζυμα που απαιτούνται για τις αντιδράσεις οξείδωσης, αναγωγής, υδρόλυσης και διμερισμού σε σύγκριση μεηπατικά μικροσώματα, και in vitro συστήματα, πολλά νέα μοντέλα τείνουν να βελτιστοποιούνται με βάση τοηπατοκύτταρο σύστημα και περαιτέρω μιμούνται το in vivo περιβάλλον για να παρατείνουν τη διατήρηση της ενζυμικής δραστηριότηταςηπατοκύτταροs, και η παράταση του χρόνου επώασης παρέχει τη δυνατότητα παρακολούθησης επαρκούς μεταβολικού μετασχηματισμού φαρμάκων βραδείας μεταβολισμού[1,2].
Λαμβάνοντας υπόψη αυτό, η IPHASE, ως ηγέτης στα βιολογικά αντιδραστήρια για έρευνα in vitro, έχει πρωτοπορήσει το σύστημα HepatoMax™ και το σύστημα μέσων HepatoCon™ με βάση τη μελέτη προσκολλημένων πρωτογενών ηπατοκυττάρων και στρωματικών κυττάρων διαφόρων γενών, συμπεριλαμβανομένων ανθρώπου, πιθήκου, σκύλου, αρουραίων και ποντικών, κ.λπ.ηπατοκύτταροs ως παράδειγμα, και τα δύο συστήματα δημιουργήθηκαν για τον προσδιορισμό της δραστικότητας και της μεταβολικής σταθερότητας συγκεκριμένων τύπων ενζύμων και την αύξηση της τιμής απόκρισης των μεταβολιτών του φαρμάκου τολβουταμίδης στις 10 ημέρες και 7 ημέρες για την επαλήθευση των συστημάτων. Ο μεταβολίτης αυξάνει την τιμή απόκρισης στις 10 ημέρες και η δραστηριότητα και η μεταβολική σταθερότητα συγκεκριμένων τύπων ενζύμων στις 7 ημέρες προσδιορίστηκαν για την επικύρωση των συστημάτων.
- (1) Οι δύο συστηματικές διαδικασίες καλλιέργειας επικύρωσης φαρμάκων είναι οι εξής:
IPHASE-HepatoMax™είναι ένα σύστημα συν-καλλιέργειας κατεψυγμένων τοιχωμάτων πρωτογενών ανθρώπινων ηπατοκυττάρων και στρωματικών κυττάρων. Πρωτογενή ανθρώπινα ηπατοκύτταρα αναζωογονήθηκαν και επωάστηκαν με στρωματικά κύτταρα σε μέσο HepatoP™ για 3 ημέρες για να ξεκινήσει η δοκιμασία χορήγησης φαρμάκου και ο μεταβολισμός του φαρμάκου διεξήχθη σε μέσο HepatoDo™ ελεύθερο ορού, το οποίο αναπληρώθηκε μόνο με το φάρμακο χωρίς αλλαγή του μέσου. Συνολικά 4, 72, 168 και 240 ώρες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου, προσδιορίστηκε η προστιθέμενη αξία των μεταβολιτών του φαρμάκου για ανάλυση.
IPHASE-HepatoCon™, από την άλλη πλευρά, είναι ένα σύστημα για την καλλιέργεια κατεψυγμένων προσκολλημένων πρωτογενών ανθρώπινων ηπατοκυττάρων σε μέσο HepatoCon™. Μετά την ανάνηψη του πρωτεύοντος ανθρώπουηπατοκύτταροs, ο προσδιορισμός χορήγησης φαρμάκου πραγματοποιήθηκε μετά από 3 ημέρες καλλιέργειας μόνο σε μέσο HepatoCon™ και ο μετέπειτα χρόνος χορήγησης, το σύστημα καλλιέργειας και η μεθοδολογία προσδιορισμού ήταν τα ίδια με αυτά του συστήματος HepatoMax™.
Εν τω μεταξύ, για να διασφαλίσει την ακρίβεια και την αυστηρότητα των αποτελεσμάτων, το IPHASE πραγματοποίησε έναν έλεγχο μέσου (χωρίς κύτταρα) και έναν έλεγχο στρωματικών κυττάρων ταυτόχρονα, με τρεις επαναλήψεις, και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ηIPHASE-HepatoMax™ καιIPHASE-HepatoCon™ Τα συστήματα παρήγαγαν μια ισχυρή μέγιστη απόκριση μεταβολίτη από την 3η ημέρα και μετά, και ότι και τα δύο έδειξαν ισχυρό ρυθμό μεταβολισμού.
- (2) Ο μεταβολισμός του φαρμάκου εξαρτάται κυρίως από τα ηπατοκύτταρα450 ΛΚενζυμικό σύστημα και η δραστηριότητά του μπορεί να μετρηθεί για καλύτερη εξέταση.
ΤοIPHASE-HepatoMax™ καιIPHASE-HepatoCon™ συστήματα έχουν καλή εφαρμογή.
Η IPHASE δημιούργησε τέσσερις κατηγορίες μέσου ελέγχου (χωρίς κύτταρα), HepatoMax™, HepatoCon™ και στρωματικά κύτταρα. Χρήση τοίχου-προσκολλημένου πρωτογενούς ανθρώπουηπατοκύτταροΓια παράδειγμα, ο μεταβολίτης αυξάνει τις τιμές τουCYP1A2, CYP2B6καιCYP3A4επαληθεύτηκαν την ημέρα 0, 3 και 7 μετάηπατοκύτταροανάκτηση για 3 ημέρες χρησιμοποιώντας φιναστερίδη, βουπροπιόνη και μιδαζολάμη ως υποστρώματα, αντίστοιχα. Οι τιμές αύξησης του μεταβολίτη έδειξαν ότι και τα δύοIPHASE-HepatoMax™ καιIPHASE-HepatoCon™ Τα συστήματα έδειξαν ενεργή ενζυμική δραστηριότητα την 7η ημέρα, προάγοντας σταθερά τον φυσιολογικό μεταβολισμό του φαρμάκου.
- (3) Εκτός από την επικύρωση της ενζυμικής δραστηριότητας, η καλή μεταβολική σταθερότητα είναι επίσης ένα σημαντικό και απαραίτητο βήμα για την επικύρωση της χρησιμότητας των μοντέλων in vitro.
Η IPHASE δημιούργησε τρεις κατηγορίες HepatoMax™, HepatoCon™ και στρωματικών κυττάρων για να καθορίσει τη μεταβολική σταθερότητα της τολβουτιμίδης σε περίοδο 80 ωρών χρησιμοποιώντας ως παράδειγμα προσκολλημένα πρωτεύοντα ανθρώπινα ηπατοκύτταρα, τα οποία χορηγήθηκαν 3 ημέρες μετά την ανάνηψη του πρωτογενούςηπατοκύτταροs, και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τόσο τοIPHASE-HepatoMax™ καιIPHASE-HepatoCon™ Και τα δύο συστήματα έδειξαν ισχυρή δραστηριότητα μεταβολικής κάθαρσης εντός της μεγαλύτερης τιμής του χρόνου ανάλυσης.
Συνοπτικά, η IPHASE, ως ηγέτης στα in vitro βιο-αντιδραστήρια, έχει αναπτυχθείIPHASE HepatoMax™ καιIPHASE HepatoCon™ in vitro μοντέλα βασισμένα σε τοίχο-εφαρμοσμένο πρωτεύοντα άνθρωπο, πίθηκο, σκύλο, αρουραίο και ποντίκιηπατοκύτταροs και στρωματικά κύτταρα διαφόρων γενών, με εξαιρετικό μεταβολικό κύκλο, ενεργές ενζυμικές δραστηριότητες και ισχυρές δραστηριότητες μεταβολικής κάθαρσης, που προσφέρουν νέες επιλογές στους πελάτες μας για την ανάπτυξη φαρμάκων χαμηλής κάθαρσης και είναι απαραίτητος συνεργάτης για την ανακάλυψη φαρμάκων! ΤοIPHASE HepatoMax™ καιIPHASE HepatoCon™ Τα μοντέλα in vitro προσφέρουν εξαιρετικούς ρυθμούς μεταβολικού κύκλου, ενεργές ενζυμικές δραστηριότητες και ισχυρές δραστηριότητες μεταβολικής κάθαρσης, παρέχοντας νέες επιλογές στους πελάτες να αναπτύξουν φάρμακα χαμηλής κάθαρσης και αποτελούν σημαντικό συνεργάτη στην ανακάλυψη φαρμάκων!
Αναφορά:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2): 152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Μια νέα μέθοδος ρελέ για τον προσδιορισμό των χαμηλών τιμών εκκαθάρισης[J]. Drug metabolism and disposition, 2012, 40(9): 1860-1865.
Ώρα ανάρτησης: 2024-07-19 17:20:41