İlaç metabolize eden enzim aktiviteleri in vitro inkübasyon süresinin uzamasıyla giderek azaldığından, geleneksel in vitro metabolizma modellerinin kısa inkübasyon süresi, düşük metabolik dönüşüm ve yüksek alt tespit limiti (CLint tahlilinin kantitatif alt sınırı 2,5 μL /(min·106 hücre)'dir) gibi sınırlamaları vardır ve bu yavaş metabolize edilen ilaçların CLint'ini doğru bir şekilde tahmin edemez.[1]. Bu arada,hepatositkarşılaştırıldığında oksidasyon, indirgeme, hidroliz ve dimerizasyon reaksiyonları için daha fazla enzime ihtiyaç duyarlar.karaciğer mikrozomlarıve in vitro sistemlerde, birçok yeni model,hepatosit sistem ve ayrıca enzim aktivitesinin tutulmasını uzatmak için in vivo ortamı taklit ederhepatositve inkübasyon süresinin uzaması, yavaş metabolize olan ilaçların yeterli metabolik dönüşümünü izleme olanağı sağlar.[1,2].
Bunu göz önünde bulundurarak, in vitro araştırmalara yönelik biyolojik reaktiflerde lider olan IPHASE, insan, maymun, köpek, sıçan ve fare vb. dahil olmak üzere çeşitli cinslerin yapışık primer hepatositleri ve stromal hücreleri üzerinde yapılan çalışmalara dayanan HepatoMax™ Sistemi ve HepatoCon™ Medya Sistemine öncülük etmiştir. HepatoMax™ Sistemi ve HepatoCon™ Medya Sistemi, yapışık birincil insan kullanılarak geliştirilmiştir.hepatositÖrnek olarak her iki sistem de belirli enzim türlerinin aktivitesinin ve metabolik stabilitesinin belirlenmesi ve sistemleri doğrulamak için tolbutamid ilacının metabolitlerinin 10 gün ve 7 günde yanıt değerindeki artışın belirlenmesi için kuruldu. Sistemleri doğrulamak için 10. günde metabolit artış tepki değeri ve 7. günde belirli enzim türlerinin aktivitesi ve metabolik stabilitesi belirlendi.
- (1)İki sistematik ilaç doğrulama kültürü süreci aşağıdaki gibidir:
IPHASE-HepatoMax™donmuş duvarlı birincil insan hepatositleri ve stromal hücrelerinden oluşan bir ortak kültür sistemidir. Primer insan hepatositleri yeniden canlandırıldı ve ilaç uygulama tahlilini başlatmak için HepatoP™ ortamında stromal hücrelerle 3 gün boyunca inkübe edildi ve ilacın metabolizması, ortamı değiştirmeden yalnızca ilaçla doldurulan serumsuz HepatoDo™ ortamında gerçekleştirildi. İlaç uygulamasından toplam 4, 72, 168 ve 240 saat sonra analiz için ilaç metabolitlerinin katma değeri belirlendi.
IPHASE-HepatoCon™Öte yandan, dondurulmuş yapışık birincil insan hepatositlerinin HepatoCon™ ortamında kültürlenmesine yönelik bir sistemdir. Birincil insanı hayata döndürdükten sonrahepatosits'de ilaç uygulama tahlili, yalnızca HepatoCon™ ortamında 3 günlük kültürden sonra gerçekleştirildi ve sonraki uygulama süresi, kültür sistemi ve tahlil metodolojisi, HepatoMax™ sistemininkilerle aynıydı.
Bu arada, sonuçların doğruluğunu ve kesinliğini sağlamak için IPHASE, üç replikasyonla aynı anda bir orta kontrol (hücresiz) ve bir stromal hücre kontrolü gerçekleştirdi ve sonuçlar şunu gösterdi:IPHASE-HepatoMax™ veIPHASE-HepatoCon™ sistemlerin 3. günden itibaren güçlü bir metabolit tepkisi ürettiğini ve her ikisinin de güçlü bir metabolik devir hızı gösterdiğini gördük.
- (2)İlaç metabolizması esas olarak hepatositlere bağlıdırCYP450enzim sistemi ve aktivitesinin daha iyi incelenebilmesi için ölçülebilir.
IPHASE-HepatoMax™ veIPHASE-HepatoCon™ sistemlerin uygulanabilirliği iyidir.
IPHASE, orta kontrol (hücresiz), HepatoMax™, HepatoCon™ ve stromal hücreler olmak üzere dört kategori oluşturdu. Duvara yapışan birincil insanı kullanmahepatositörnek olarak metabolit artış değerleriCYP1A2, CYP2B6veCYP3A4sonrasında 0, 3 ve 7. günlerde doğrulandı.hepatositSubstrat olarak sırasıyla finasterid, bupropion ve midazolam kullanılarak 3 gün boyunca geri kazanım. Metabolit artış değerleri şunu gösterdi:IPHASE-HepatoMax™ veIPHASE-HepatoCon™ sistemler 7. günde aktif enzim aktivitesi göstererek normal ilaç metabolizmasını sürekli olarak teşvik etti.
- (3) Enzim aktivitesinin doğrulanmasına ek olarak, iyi metabolik stabilite de in vitro modellerin kullanımının doğrulanmasında önemli ve vazgeçilmez bir adımdır.
IPHASE, birincil hücrenin resüsitasyonundan 3 gün sonra uygulanan, yapışkan birincil insan hepatositlerini örnek olarak kullanarak Tolbutimidin 80 saatlik bir süre boyunca metabolik stabilitesini belirlemek için HepatoMax™, HepatoCon™ ve stromal hücrelerden oluşan üç kategori oluşturdu.hepatositve sonuçlar gösterdi ki her ikisi deIPHASE-HepatoMax™ veIPHASE-HepatoCon™ sistemlerin her ikisi de test süresinin en uzun değeri içerisinde sağlam metabolik temizleme aktivitesi gösterdi.
Özetle, in vitro biyoreaktiflerde lider olan IPHASE,IPHASE HepatoMax™ veIPHASE HepatoCon™ Duvara uygulanan birincil insan, maymun, köpek, sıçan ve fareye dayanan in vitro modellerhepatositMüşterilerimize düşük-klirensli ilaçlar geliştirmek için yeni seçenekler sunan ve ilaç keşfini gerçekleştirmek için vazgeçilmez bir ortak olan mükemmel metabolik döngü, aktif enzim aktiviteleri ve güçlü metabolik temizleme aktivitelerine sahip çeşitli cinslerin stromal hücreleri ve stromal hücreleri!IPHASE HepatoMax™ veIPHASE HepatoCon™ in vitro modeller mükemmel metabolik devir hızları, aktif enzim aktiviteleri ve güçlü metabolik temizleme aktiviteleri sunarak müşterilere düşük-klirensli ilaçlar geliştirmeleri için yeni seçenekler sunar ve ilaç keşfinde önemli bir ortaktır!
Referans:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach RS, ve ark. Düşük - boşluk değerlerini belirlemek için yeni bir röle yöntemi[J]. İlaç metabolizması ve dağılımı, 2012, 40(9): 1860-1865.
Gönderim zamanı: 2024-07-19 17:20:41