Koska lääkettä metaboloivien entsyymien aktiivisuus vähenee vähitellen in vitro -inkubointiajan pidentyessä, perinteisillä in vitro -metaboliamalleilla on rajoituksia, kuten lyhyt inkubaatioaika, alhainen metabolinen konversio ja korkea havaitsemisen alaraja (CLint-määrityksen kvantitatiivinen alaraja on 2,5 μL /( min·106 solua)), mikä ei pysty ennustamaan tarkasti hitaasti metaboloituvien lääkkeiden CLint-arvoa.[1]. sillä välinhepatosyyttiSillä on enemmän entsyymejä, joita tarvitaan hapetus-, pelkistys-, hydrolyysi- ja dimerisaatioreaktioihin verrattunamaksan mikrosomit, ja in vitro -järjestelmissä monet uudet mallit yleensä optimoidaan perustuenhepatosyytti järjestelmä ja jäljitellä edelleen in vivo -ympäristöä entsyymiaktiivisuuden säilymisen pidentämiseksihepatosyyttis, ja inkubaatioajan pidentyminen antaa mahdollisuuden seurata hitaasti metaboloituvien lääkkeiden riittävää metabolista transformaatiota[1,2].
Tämän vuoksi IPHASE, johtava biologisten reagenssien valmistaja in vitro -tutkimukseen, on ollut edelläkävijä HepatoMax™-järjestelmässä ja HepatoCon™-mediajärjestelmässä, joka perustuu kiinnittyneiden primaaristen maksasolujen ja eri sukujen stroomasolujen tutkimukseen, mukaan lukien ihminen, apina, koira, rotta ja hiiri jne.hepatosyyttis esimerkkinä, ja molemmat järjestelmät perustettiin spesifisten entsyymityyppien aktiivisuuden ja metabolisen stabiiliuden määrittämiseksi sekä tolbutamidin lääkeaineen metaboliittien vastearvon määrittämiseksi 10 päivän ja 7 päivän kohdalla järjestelmien todentamiseksi. Metaboliitin lisäysvastearvo 10 päivän kohdalla ja tiettyjen entsyymityyppien aktiivisuus ja metabolinen stabiilisuus 7 päivän kohdalla määritettiin järjestelmien validoimiseksi.
- (1) Kaksi systemaattista lääkevalidointiviljelyprosessia ovat seuraavat:
IPHASE-HepatoMax™on pakasteseinäisten ihmisen primaaristen maksasolujen ja stroomasolujen yhteisviljelyjärjestelmä. Ihmisen primääriset hepatosyytit elvytettiin ja inkuboitiin stroomasolujen kanssa HepatoP™-elatusaineessa 3 päivää lääkkeen antomäärityksen aloittamiseksi, ja lääkkeen metabolia suoritettiin seerumittomassa HepatoDo™-elatusaineessa, joka täydennettiin vain lääkkeellä väliainetta vaihtamatta. Yhteensä 4, 72, 168 ja 240 tuntia lääkkeen annon jälkeen määritettiin lääkeaineenvaihduntatuotteiden lisäarvo analyysiä varten.
IPHASE-HepatoCon™toisaalta on järjestelmä jäädytettyjen kiinnittyneiden ihmisen primaaristen maksasolujen viljelemiseksi HepatoCon™-elatusaineessa. Ensisijaisen ihmisen elvyttämisen jälkeenhepatosyyttis, lääkkeen antomääritys suoritettiin 3 päivän viljelyn jälkeen pelkässä HepatoCon™-elatusaineessa, ja seuraava antoaika, viljelyjärjestelmä ja määritysmetodologia olivat samat kuin HepatoMax™-järjestelmässä.
Sillä välin varmistaakseen tulosten tarkkuuden ja tarkkuuden IPHASE suoritti väliainekontrollin (soluton) ja stroomasolukontrollin samanaikaisesti kolmella toistolla, ja tulokset osoittivat, ettäIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ järjestelmät tuottivat vahvan huippuaineenvaihduntavasteen päivästä 3 eteenpäin ja että ne molemmat osoittivat voimakasta aineenvaihduntanopeutta.
- (2) Lääkeaineenvaihdunta riippuu pääasiassa maksasoluistaCYP450entsyymijärjestelmää, ja sen aktiivisuutta voidaan mitata paremmin tutkimiseksi.
TheIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ järjestelmillä on hyvä soveltuvuus.
IPHASE määritti neljä luokkaa elatusainekontrollia (ei soluja), HepatoMax™-, HepatoCon™- ja stroomasolut. Käyttämällä seinään kiinnitettyä ensisijaista ihmistähepatosyyttiEsimerkiksi metaboliitin lisäysarvotCYP1A2, CYP2B6jaCYP3A4varmistettiin päivinä 0, 3 ja 7 sen jälkeenhepatosyytti3 päivän ajan käyttämällä substraatteina finasteridia, bupropionia ja midatsolaamia. Metaboliitin lisäysarvot osoittivat, että molemmatIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ järjestelmät osoittivat aktiivista entsyymiaktiivisuutta päivään 7 mennessä, mikä edisti jatkuvasti normaalia lääkeaineenvaihduntaa.
- (3) Entsyymiaktiivisuuden validoinnin lisäksi hyvä metabolinen stabiilius on myös tärkeä ja välttämätön vaihe in vitro -mallien käyttökelpoisuuden validoinnissa.
IPHASE asetti kolme HepatoMax™-, HepatoCon™- ja stroomasolujen luokkaa määrittääkseen tolbutimidin metabolisen stabiilisuuden 80 tunnin aikana käyttämällä esimerkkinä kiinnittyneitä ihmisen primaarisia hepatosyyttejä, jotka annettiin 3 päivää primaarisen elvytyksen jälkeen.hepatosyyttis, ja tulokset osoittivat, että molemmatIPHASE-HepatoMax™ jaIPHASE-HepatoCon™ Molemmat järjestelmät osoittivat vahvaa metabolista puhdistumaaktiivisuutta määritysajan pisimmän arvon sisällä.
Yhteenvetona voidaan todeta, että IPHASE, joka on johtava in vitro -bioreagenssien valmistaja, on kehittynytIPHASE HepatoMax™ jaIPHASE HepatoCon™ in vitro -mallit, jotka perustuvat seinä-sovellettuihin primaarisiin ihmisiin, apinoihin, koiriin, rottaan ja hiireenhepatosyyttis ja eri sukujen stroomasolut, joilla on erinomainen aineenvaihdunta, aktiivinen entsyymitoiminta ja voimakas metabolinen puhdistuma, jotka tarjoavat asiakkaillemme uusia vaihtoehtoja kehittää matalan puhdistuman lääkkeitä ja ovat korvaamaton kumppani lääkekehityksen toteuttamisessa! TheIPHASE HepatoMax™ jaIPHASE HepatoCon™ in vitro -mallit tarjoavat erinomaiset aineenvaihduntanopeudet, aktiiviset entsyymiaktiivisuudet ja voimakkaat metaboliset puhdistumat, tarjoten asiakkaille uusia vaihtoehtoja kehittää matalan puhdistuman lääkkeitä ja ovat tärkeä kumppani lääkekehityksessä!
Viite:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et ai. Uusi relemenetelmä pienten-välysten arvojen[J] määrittämiseen. Lääkkeiden aineenvaihdunta ja jakautuminen, 2012, 40(9): 1860-1865.
Lähetysaika: 2024-07-19 17:20:41