Оскільки активність ферменту, що метаболізує ліки, поступово знижується з подовженням часу інкубації in vitro, традиційні моделі метаболізму in vitro мають обмеження, такі як короткий час інкубації, низька метаболічна конверсія та висока нижня межа виявлення (кількісна нижня межа аналізу CLint становить 2,5 мкл/(хв·106 клітин)), що не може точно передбачити CLint повільно метаболізованих препаратів.[1]. Тим часом,гепатоцитмають більше ферментів, необхідних для реакцій окислення, відновлення, гідролізу та димеризації порівняно змікросоми печінки, і в системах in vitro багато нових моделей, як правило, оптимізовано на основігепатоцит системи та додатково імітувати середовище in vivo, щоб продовжити збереження активності ферменту вгепатоцитs, а подовження часу інкубації дає можливість контролювати достатню метаболічну трансформацію повільно метаболізованих препаратів.[1,2].
З огляду на це IPHASE, як лідер у виробництві біологічних реагентів для досліджень in vitro, запровадила систему HepatoMax™ і HepatoCon™ Media System, засновану на вивченні адгезивних первинних гепатоцитів і стромальних клітин різних пологів, включаючи людину, мавпу, собаку, щура, мишу тощо. Системи HepatoMax™ і HepatoCon™ Media System були розроблені з використанням адгезивної первинної людської системи.гепатоцитs як приклад, і обидві системи були налаштовані для визначення активності та метаболічної стабільності конкретних типів ферментів і підвищення значення відповіді метаболітів препарату толбутамід через 10 днів і 7 днів для перевірки систем. Значення відповіді на збільшення метаболіту через 10 днів, а також активність і метаболічну стабільність конкретних типів ферментів через 7 днів було визначено для підтвердження систем.
- (1) Нижче наведено два систематичних процеси перевірки культури препаратів:
IPHASE-HepatoMax™це система спільного культивування заморожених первинних людських гепатоцитів і стромальних клітин. Первинні гепатоцити людини реанімували та інкубували зі стромальними клітинами в середовищі HepatoP™ протягом 3 днів, щоб розпочати аналіз введення препарату, і метаболізм препарату проводили в безсироватковому середовищі HepatoDo™, яке поповнювали лише препаратом без зміни середовища. Загалом через 4, 72, 168 та 240 годин після введення препарату визначали додану вартість метаболітів препарату для аналізу.
IPHASE-HepatoCon™, з іншого боку, це система для культивування заморожених адгезивних первинних гепатоцитів людини в середовищі HepatoCon™. Після первинної реанімації людинигепатоцитs, аналіз введення препарату проводили через 3 дні культивування лише в середовищі HepatoCon™, а наступний час введення, культуральна система та методологія аналізу були такими ж, як і для системи HepatoMax™.
Тим часом, щоб забезпечити точність і точність результатів, IPHASE виконала контроль середовища (клітинний-вільний) і контроль стромальних клітин одночасно з трьома повторами, і результати показали, щоIPHASE-HepatoMax™ іIPHASE-HepatoCon™ системи виробляли сильну пікову реакцію метаболіту, починаючи з 3-го дня, і що вони обидва показали високу швидкість метаболічного обороту.
- (2) Метаболізм ліків в основному залежить від гепатоцитівCYP450ферментну систему, і її активність можна виміряти для кращого вивчення.
TheIPHASE-HepatoMax™ іIPHASE-HepatoCon™ системи мають гарну застосовність.
IPHASE створив чотири категорії контрольного середовища (без клітин), HepatoMax™, HepatoCon™ і стромальні клітини. Використання основної людини, що приєднується до стінигепатоцитs як приклад, метаболіт збільшує значенняCYP1A2, CYP2B6іCYP3A4були перевірені на 0, 3 і 7 день післягепатоцитвідновлення протягом 3 днів з використанням фінастериду, бупропіону та мідазоламу як субстратів відповідно. Значення збільшення метаболіту показали, що обидваIPHASE-HepatoMax™ іIPHASE-HepatoCon™ системи показали активну ферментативну активність на 7 день, постійно сприяючи нормальному метаболізму ліків.
- (3) На додаток до перевірки активності ферменту, хороша метаболічна стабільність також є важливим і незамінним кроком у перевірці придатності моделей in vitro.
IPHASE створив три категорії HepatoMax™, HepatoCon™ і стромальних клітин для визначення метаболічної стабільності толбутіміду протягом 80 годин, використовуючи як приклад прикріплені первинні гепатоцити людини, які вводили через 3 дні після реанімації первиннихгепатоцитs, і результати показали, що обидваIPHASE-HepatoMax™ іIPHASE-HepatoCon™ обидві системи продемонстрували стійку метаболічну кліренсну активність протягом найдовшого значення часу аналізу.
Підсумовуючи, IPHASE, як лідер у виробництві біо-реагентів in vitro, розвинувсяIPHASE HepatoMax™ іIPHASE HepatoCon™ Моделі in vitro, засновані на стінах-прикладних первинних моделях людини, мавпи, собаки, щура та мишігепатоцитs і стромальні клітини різних родів, з чудовим метаболічним оборотом, активною ферментативною діяльністю та потужною метаболічною кліренсною діяльністю, що пропонує нашим клієнтам нові можливості для розробки ліків із низьким-кліренсом і є незамінним партнером для відкриття ліків! TheIPHASE HepatoMax™ іIPHASE HepatoCon™ Моделі in vitro пропонують чудові швидкості метаболічного обміну, активну ферментну діяльність і потужну метаболічну кліренсну діяльність, надаючи клієнтам нові можливості для розробки препаратів із низьким кліренсом, і є важливим партнером у відкритті ліків!
Посилання:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Ді Л., Трапа П., Обах Р. С. та ін. Новий метод реле для визначення низьких значень зазору [J]. Метаболізм і розподіл лікарських засобів, 2012, 40(9): 1860-1865.
Час публікації: 2024-07-19 17:20:41