Ponieważ aktywność enzymów metabolizujących leki stopniowo maleje wraz z wydłużaniem czasu inkubacji in vitro, tradycyjne modele metabolizmu in vitro mają ograniczenia, takie jak krótki czas inkubacji, niska konwersja metaboliczna i wysoka dolna granica wykrywalności (ilościowa dolna granica testu CLint wynosi 2,5 µl/(min·106 komórek)), przez co nie można dokładnie przewidzieć CLint leków wolno metabolizowanych[1]. Tymczasemhepatocytmają więcej enzymów wymaganych do reakcji utleniania, redukcji, hydrolizy i dimeryzacji w porównaniu domikrosomy wątrobyoraz w systemach in vitro wiele nowych modeli jest zwykle optymalizowanych w oparciu ohepatocyt i dodatkowo naśladują środowisko in vivo, aby przedłużyć zachowanie aktywności enzymuhepatocyts, a wydłużenie czasu inkubacji umożliwia monitorowanie wystarczającej przemiany metabolicznej leków wolno metabolizujących[1,2].
Mając to na uwadze, IPHASE, jako lider w dziedzinie odczynników biologicznych do badań in vitro, jest pionierem systemów HepatoMax™ i HepatoCon™ Media System opartych na badaniu przylegających pierwotnych hepatocytów i komórek zrębowych różnych rodzajów, w tym ludzi, małp, psów, szczurów i myszy itp. Systemy HepatoMax™ i HepatoCon™ Media System zostały opracowane przy użyciu przylegających pierwotnych ludzkichhepatocyts jako przykład i oba systemy utworzono w celu określenia aktywności i stabilności metabolicznej określonych typów enzymów oraz wzrostu wartości odpowiedzi metabolitów leku tolbutamidu po 10 i 7 dniach w celu weryfikacji systemów. W celu walidacji systemów oznaczono wartość odpowiedzi na wzrost metabolizmu po 10 dniach oraz aktywność i stabilność metaboliczną określonych typów enzymów po 7 dniach.
- (1) Dwa systematyczne procesy kultury walidacji leku są następujące:
IPHASE-HepatoMax™to system współhodowli zamrożonych pierwotnych ludzkich hepatocytów i komórek zrębowych o ściankach. Pierwotne ludzkie hepatocyty reanimowano i inkubowano z komórkami zrębowymi w pożywce HepatoP™ przez 3 dni, aby rozpocząć test podawania leku, a metabolizm leku prowadzono w pożywce HepatoDo™ pozbawionej surowicy-, którą uzupełniano wyłącznie lekiem bez zmiany pożywki. Do analizy określono wartość dodaną metabolitów leku łącznie 4, 72, 168 i 240 godzin po podaniu leku.
IPHASE-HepatoCon™z drugiej strony jest systemem do hodowli zamrożonych, przylegających pierwotnych ludzkich hepatocytów w pożywce HepatoCon™. Po reanimacji głównego człowiekahepatocyts, test podawania leku przeprowadzono po 3 dniach hodowli w samej pożywce HepatoCon™, a czas kolejnego podawania, system hodowli i metodologia testu były takie same jak w przypadku systemu HepatoMax™.
Tymczasem, aby zapewnić dokładność i rygorystyczność wyników, w ramach projektu IPHASE przeprowadzono jednocześnie kontrolę pożywki (bez komórek) i kontrolę komórek zrębu w trzech powtórzeniach, a wyniki wykazały, żeIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ systemy wytwarzały silną szczytową odpowiedź metabolitów począwszy od dnia 3 i że w obu przypadkach wykazano wysoki współczynnik przemiany metabolicznej.
- (2) Metabolizm leków zależy głównie od hepatocytówCYP450układu enzymatycznego, a jego aktywność można zmierzyć w celu lepszego zbadania.
TheIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ systemy mają dobrą przydatność.
IPHASE określiło cztery kategorie pożywek kontrolnych (bez komórek), HepatoMax™, HepatoCon™ i komórki zrębowe. Używanie-przylegającego do ściany pierwotnego człowiekahepatocytna przykład, metabolit zwiększa wartościCYP1A2, CYP2B6iCYP3A4zostały zweryfikowane w dniu 0, 3 i 7 pohepatocytrekonwalescencja przez 3 dni, stosując odpowiednio finasteryd, bupropion i midazolam jako substraty. Wartości wzrostu metabolizmu wykazały, że obaIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ systemy wykazały aktywną aktywność enzymatyczną do 7. dnia, konsekwentnie promując prawidłowy metabolizm leku.
- (3)Oprócz walidacji aktywności enzymatycznej, ważnym i niezbędnym krokiem w walidacji użyteczności modeli in vitro jest także dobra stabilność metaboliczna.
W ramach projektu IPHASE wyznaczono trzy kategorie HepatoMax™, HepatoCon™ i komórek zrębowych w celu określenia stabilności metabolicznej tolbutymidu w okresie 80 godzin na przykładzie przylegających pierwotnych ludzkich hepatocytów, które podano 3 dni po resuscytacji pierwotnejhepatocyts, a wyniki wykazały, że zarównoIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ oba systemy wykazały silną aktywność klirensu metabolicznego w najdłuższym czasie testu.
Podsumowując, IPHASE rozwinęło się jako lider w dziedzinie bioodczynników in vitroIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ modele in vitro oparte na naniesionych na ścianę pierwotnych ludziach, małpach, psach, szczurach i myszachhepatocyti komórki zrębowe różnych rodzajów, charakteryzujące się doskonałym obrotem metabolicznym, aktywną aktywnością enzymów i silnym działaniem w zakresie usuwania metabolicznego, które oferują naszym klientom nowe możliwości w zakresie opracowywania leków o niskim klirensie i są niezbędnym partnerem w odkrywaniu leków! TheIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ modele in vitro oferują doskonałe tempo przemian metabolicznych, aktywne działanie enzymów i silne działanie związane z usuwaniem metabolicznym, zapewniając klientom nowe możliwości opracowywania leków o niskim klirensie i są ważnym partnerem w odkrywaniu leków!
Odniesienie:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R. S. i in. Nowatorska metoda przekaźnikowa do określania wartości małych prześwitów [J]. Metabolizm i rozmieszczenie leków, 2012, 40(9): 1860-1865.
Czas publikacji: 2024-07-19 17:20:41