Budući da aktivnosti enzima koji metaboliziraju lijek postupno opadaju s produžavanjem vremena in vitro inkubacije, tradicionalni in vitro modeli metabolizma imaju ograničenja kao što su kratko vrijeme inkubacije, niska metabolička konverzija i visoka donja granica detekcije (kvantitativna donja granica CLint testa je 2,5 μL /(min·106 metaboličnih stanica)), što može predvidjeti CLint metabolizam koji se ne može precizno predvidjeti.[1]. u međuvremenu,hepatocitaimaju više enzima potrebnih za reakcije oksidacije, redukcije, hidrolize i dimerizacije u odnosu namikrozomi jetre, i u in vitro sistemima, mnogi novi modeli imaju tendenciju da se optimizuju na osnovuhepatocita sistema i dalje oponašaju okruženje in vivo kako bi produžili zadržavanje aktivnosti enzima uhepatocitas, a produženje vremena inkubacije pruža mogućnost praćenja dovoljne metaboličke transformacije lijekova koji se sporo metaboliziraju[1,2].
S obzirom na to, IPHASE, kao lider u biološkim reagensima za in vitro istraživanja, uveo je HepatoMax™ System i HepatoCon™ Media System na osnovu proučavanja adherentnih primarnih hepatocita i stromalnih ćelija različitih rodova, uključujući ljude, majmuna, pasa, pacova i miševa, itd. Sistem HepatoMax™ su razvili primarni sistem HepatoMax™ za ljude.hepatocitas kao primjer, a oba sistema su postavljena za određivanje aktivnosti i metaboličke stabilnosti specifičnih tipova enzima i povećanje vrijednosti odgovora metabolita lijeka tolbutamida na 10 i 7 dana radi verifikacije sistema. Vrijednost odgovora povećanja metabolita nakon 10 dana, a aktivnost i metabolička stabilnost specifičnih tipova enzima nakon 7 dana su određene za validaciju sistema.
- (1) Dva sistematska procesa kulture validacije lijekova su sljedeća:
IPHASE-HepatoMax™je kokulturni sistem zamrznutih primarnih ljudskih hepatocita i stromalnih ćelija. Primarni humani hepatociti su oživljeni i inkubirani sa stromalnim stanicama u HepatoP™ mediju 3 dana da bi se započelo ispitivanje primjene lijeka, a metabolizam lijeka je proveden u HepatoDo™ mediju bez seruma, koji je dopunjen samo lijekom bez promjene podloge. Ukupno 4, 72, 168 i 240 sati nakon primjene lijeka određena je dodana vrijednost metabolita lijeka za analizu.
IPHASE-HepatoCon™, s druge strane, je sistem za uzgoj zamrznutih adherentnih primarnih ljudskih hepatocita u HepatoCon™ mediju. Nakon reanimacije primarnog čovjekahepatocitas, analiza primjene lijeka je obavljena nakon 3 dana kulture samo u HepatoCon™ mediju, a naknadno vrijeme primjene, sistem kulture i metodologija analize bili su isti kao i kod HepatoMax™ sistema.
U međuvremenu, da bi se osigurala tačnost i rigoroznost rezultata, IPHASE je izvršio kontrolu medija (bez ćelija) i kontrolu stromalnih ćelija u isto vreme, sa tri ponavljanja, a rezultati su pokazali daIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ sistemi su proizveli snažan vršni odgovor metabolita od 3. dana nadalje, i da su oba pokazala snažnu stopu metaboličke promjene.
- (2) Metabolizam lijekova uglavnom ovisi o hepatocituCYP450enzimskog sistema, a njegova aktivnost se može izmjeriti radi boljeg ispitivanja.
TheIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ sistemi imaju dobru primenljivost.
IPHASE je postavio četiri kategorije kontrole medijuma (bez ćelija), HepatoMax™, HepatoCon™ i stromalne ćelije. Koristeći primarnu-ljudsku osobuhepatocitas kao primjer, metabolit povećava vrijednosti odCYP1A2, CYP2B6iCYP3A4su verifikovane 0, 3 i 7 dana nakon togahepatocitaoporavak tokom 3 dana uz upotrebu finasterida, bupropiona i midazolama kao supstrata. Vrijednosti povećanja metabolita su pokazale da obojeIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ sistemi su pokazali aktivnu aktivnost enzima do 7. dana, dosljedno promovirajući normalan metabolizam lijekova.
- (3) Pored validacije aktivnosti enzima, dobra metabolička stabilnost je takođe važan i neophodan korak u validaciji korisnosti in vitro modela.
IPHASE je postavio tri kategorije HepatoMax™, HepatoCon™ i stromalnih ćelija kako bi odredio metaboličku stabilnost tolbutimida u periodu od 80 sati koristeći kao primjer adherentne primarne ljudske hepatocite, koji su primijenjeni 3 dana nakon reanimacije primarnoghepatocitas, a rezultati su pokazali da obaIPHASE-HepatoMax™ iIPHASE-HepatoCon™ oba sistema su pokazala robusnu metaboličku aktivnost klirensa unutar najduže vrijednosti vremena analize.
Ukratko, IPHASE, kao lider u in vitro bio-reagensima, se razvioIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ in vitro modeli zasnovani na primarnim-primijenjenim na zidu ljudi, majmuna, pasa, pacova i mišahepatocitas i stromalnih ćelija različitih rodova, sa odličnim metaboličkim prometom, aktivnim enzimskim aktivnostima i snažnim metaboličkim aktivnostima čišćenja, koje našim kupcima nude nove izbore za razvoj lijekova sa niskim-klirensom, i nezamjenjiv su partner za realizaciju otkrića lijekova! TheIPHASE HepatoMax™ iIPHASE HepatoCon™ in vitro modeli nude odlične stope metaboličkog obrta, aktivne enzimske aktivnosti i snažne aktivnosti metaboličkog čišćenja, pružajući nove mogućnosti kupcima da razviju lijekove sa niskim-klirensom, i važan su partner u otkrivanju lijekova!
referenca:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Nova relejna metoda za određivanje niske-vrijednosti zazora[J]. Metabolizam i dispozicija lijekova, 2012, 40(9): 1860-1865.
Vrijeme objave: 2024-07-19 17:20:41