Deoarece activitățile enzimelor de metabolizare a medicamentelor scad treptat odată cu prelungirea timpului de incubare in vitro, modelele tradiționale de metabolism in vitro au limitări, cum ar fi timpul scurt de incubare, conversia metabolică scăzută și limita inferioară ridicată de detecție (limita inferioară cantitativă a testului CLint este de 2,5 μL /(min·106 celule)), ceea ce nu poate prezice cu exactitate CLint a medicamentelor metabolizate lent.[1]. Între timp,hepatocitau mai multe enzime necesare pentru reacțiile de oxidare, reducere, hidroliză și dimerizare în comparație cumicrozomi hepaticiși în sistemele in vitro, multe modele noi tind să fie optimizate pe bazahepatocit sistem și să mimeze în continuare mediul in vivo pentru a prelungi reținerea activității enzimatice înhepatocits, iar prelungirea timpului de incubare oferă posibilitatea de a monitoriza transformarea metabolică suficientă a medicamentelor cu metabolizare lentă[1,2].
Având în vedere acest lucru, IPHASE, ca lider în reactivi biologici pentru cercetarea in vitro, a inițiat sistemul HepatoMax™ și HepatoCon™ Media System bazat pe studiul hepatocitelor primare aderente și al celulelor stromale din diferite genuri, inclusiv uman, maimuță, canin, șobolan și șoarece, etc.hepatocits de exemplu, și ambele sisteme au fost configurate pentru determinarea activității și stabilității metabolice a unor tipuri de enzime specifice și creșterea valorii de răspuns a metaboliților medicamentului tolbutamidă la 10 zile și 7 zile pentru a verifica sistemele. Valoarea de răspuns a creșterii metaboliților la 10 zile și activitatea și stabilitatea metabolică a unor tipuri de enzime specifice la 7 zile au fost determinate pentru a valida sistemele.
- (1) Cele două procese sistematice de cultură de validare a medicamentelor sunt următoarele:
IPHASE-HepatoMax™este un sistem de co-cultură de hepatocite umane primare înghețate și celule stromale. Hepatocitele umane primare au fost resuscitate și incubate cu celule stromale în mediu HepatoP™ timp de 3 zile pentru a începe testul de administrare a medicamentului, iar metabolismul medicamentului a fost efectuat în mediu HepatoDo™ fără ser - care a fost completat numai cu medicament fără schimbarea mediului. În total, la 4, 72, 168 și 240 de ore după administrarea medicamentului, valoarea adăugată a metaboliților medicamentului a fost determinată pentru analiză.
IPHASE-HepatoCon™, pe de altă parte, este un sistem pentru cultivarea hepatocitelor umane primare aderente congelate în mediu HepatoCon™. După resuscitarea omului primarhepatocits, testul de administrare a medicamentului a fost efectuat după 3 zile de cultură numai în mediu HepatoCon™, iar timpul ulterioar de administrare, sistemul de cultură și metodologia de analiză au fost aceleași cu cele ale sistemului HepatoMax™.
Între timp, pentru a asigura acuratețea și rigoarea rezultatelor, IPHASE a efectuat un control mediu (cel-free) și un control al celulelor stromale în același timp, cu trei replicări, iar rezultatele au arătat căIPHASE-HepatoMax™ şiIPHASE-HepatoCon™ sistemele au produs un răspuns de vârf puternic al metaboliților începând cu ziua 3 și că ambele au prezentat o rată de rotație metabolică puternică.
- (2) Metabolismul medicamentelor depinde în principal de hepatocitCYP450sistemul enzimatic, iar activitatea acestuia poate fi măsurată pentru a o examina mai bine.
TheIPHASE-HepatoMax™ şiIPHASE-HepatoCon™ sistemele au o aplicabilitate bună.
IPHASE a creat patru categorii de control mediu (fără celule), HepatoMax™, HepatoCon™ și celule stromale. Folosind un om primar aderent de peretehepatocits de exemplu, metabolitul crește valorile deCYP1A2, CYP2B6şiCYP3A4au fost verificate în ziua 0, 3 și 7 dupăhepatocitrecuperare timp de 3 zile folosind ca substrat finasterid, bupropion și, respectiv, midazolam. Valorile de creștere a metaboliților au arătat că ambeleIPHASE-HepatoMax™ şiIPHASE-HepatoCon™ sistemele au arătat activitate enzimatică activă până în ziua 7, promovând în mod constant metabolismul normal al medicamentului.
- (3) Pe lângă validarea activității enzimatice, o bună stabilitate metabolică este, de asemenea, un pas important și indispensabil în validarea utilității modelelor in vitro.
IPHASE a creat trei categorii de HepatoMax™, HepatoCon™ și celule stromale pentru a determina stabilitatea metabolică a tolbutimidei pe o perioadă de 80 de ore, utilizând ca exemplu hepatocite umane primare aderente, care au fost administrate la 3 zile după resuscitarea primare.hepatocits, iar rezultatele au arătat că atâtIPHASE-HepatoMax™ şiIPHASE-HepatoCon™ ambele sisteme au prezentat o activitate de clearance metabolică robustă în cea mai lungă valoare a timpului de analiză.
Pe scurt, IPHASE, ca lider în bio-reactivi in vitro, sa dezvoltatIPHASE HepatoMax™ şiIPHASE HepatoCon™ modele in vitro bazate pe perete-aplicat primar uman, maimuță, canin, șobolan și șoarecehepatocitcelule stromale de diferite genuri, cu o cifră de afaceri metabolică excelentă, activități enzimatice active și activități puternice de clearance metabolic, care oferă clienților noștri noi opțiuni pentru a dezvolta medicamente cu clearance scăzut și sunt un partener indispensabil pentru a realiza descoperirea medicamentelor! TheIPHASE HepatoMax™ şiIPHASE HepatoCon™ Modelele in vitro oferă rate excelente de rotație metabolică, activități enzimatice active și activități puternice de clearance metabolic, oferind noi opțiuni clienților pentru a dezvolta medicamente cu clearance scăzut și sunt un partener important în descoperirea medicamentelor!
Referinta:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. O nouă metodă de releu pentru determinarea valorilor de clearance scăzute[J]. Metabolismul și dispoziția medicamentelor, 2012, 40(9): 1860-1865.
Ora postării: 2024-07-19 17:20:41