Тъй като активността на ензимите, метаболизиращи лекарството, постепенно намалява с удължаването на времето за инкубация in vitro, традиционните модели на метаболизъм in vitro имат ограничения като кратко време на инкубация, ниска метаболитна конверсия и висока долна граница на откриване (количествената долна граница на анализа CLint е 2,5 μL /(мин·106 клетки)), което не може да предскаже точно CLint на бавно метаболизирани лекарства[1]. Междувременно,хепатоцитимат повече ензими, необходими за реакциите на окисление, редукция, хидролиза и димеризация в сравнение счернодробни микрозоми, а в ин витро системите много нови модели са склонни да бъдат оптимизирани въз основа нахепатоцит система и допълнително имитира in vivo средата, за да удължи задържането на ензимната активност вхепатоцитs, а удължаването на инкубационното време осигурява възможност за наблюдение на достатъчна метаболитна трансформация на бавно метаболизиращи лекарства[1,2].
С оглед на това, IPHASE, като лидер в биологичните реагенти за in vitro изследвания, е пионер в HepatoMax™ System и HepatoCon™ Media System, базирани на изследването на прилепнали първични хепатоцити и стромални клетки от различни родове, включително хора, маймуни, кучета, плъхове и мишки и т.н. HepatoMax™ System и HepatoCon™ Media System са разработени с помощта на прилепналите първични човешки клеткихепатоцитs като пример, и двете системи бяха създадени за определяне на активността и метаболитната стабилност на специфични типове ензими и повишаването на стойността на отговора на метаболитите на лекарството толбутамид на 10 дни и 7 дни, за да се проверят системите. Стойността на отговора на повишаване на метаболита на 10-ия ден и активността и метаболитната стабилност на специфични видове ензими на 7-ия ден бяха определени за валидиране на системите.
- (1) Двата процеса на систематично валидиране на културата на лекарството са както следва:
IPHASE-HepatoMax™е система за съвместно култивиране на първични човешки хепатоцити със замразени стени и стромални клетки. Първичните човешки хепатоцити бяха реанимирани и инкубирани със стромални клетки в среда HepatoP™ в продължение на 3 дни, за да започне анализът за прилагане на лекарството, и метаболизмът на лекарството беше извършен в свободна от серум среда HepatoDo™, която беше попълнена само с лекарството без промяна на средата. Общо 4, 72, 168 и 240 часа след прилагане на лекарството беше определена добавената стойност на метаболитите на лекарството за анализ.
IPHASE-HepatoCon™, от друга страна, е система за култивиране на замразени прилепнали първични човешки хепатоцити в среда HepatoCon™. След реанимация на първичния човекхепатоцитs, анализът за прилагане на лекарството се извършва след 3 дни култивиране само в среда HepatoCon™ и последващото време на прилагане, системата за култивиране и методологията на анализа са същите като тези на системата HepatoMax™.
Междувременно, за да се гарантира точността и строгостта на резултатите, IPHASE извърши среден контрол (без клетки) и контрол на стромални клетки едновременно, с три репликации, и резултатите показаха, чеIPHASE-HepatoMax™ иIPHASE-HepatoCon™ системите произвеждат силен пиков метаболитен отговор от ден 3 нататък и че и двете показват силна скорост на метаболитен обмен.
- (2) Метаболизмът на лекарствата зависи главно от хепатоцитаCYP450ензимна система и нейната активност може да бъде измерена за по-добро изследване.
TheIPHASE-HepatoMax™ иIPHASE-HepatoCon™ системи имат добра приложимост.
IPHASE настрои четири категории контролна среда (без клетки), HepatoMax™, HepatoCon™ и стромални клетки. Използване на първичен човек, прилепнал към стенатахепатоцитs като пример, метаболитът повишава стойностите наCYP1A2, CYP2B6иCYP3A4бяха проверени на ден 0, 3 и 7 след товахепатоцитвъзстановяване за 3 дни, като се използват съответно финастерид, бупропион и мидазолам като субстрати. Стойностите за повишаване на метаболита показват, че и дветеIPHASE-HepatoMax™ иIPHASE-HepatoCon™ системи показаха активна ензимна активност до 7-ия ден, последователно насърчавайки нормалния метаболизъм на лекарството.
- (3) В допълнение към валидирането на ензимната активност, добрата метаболитна стабилност също е важна и незаменима стъпка при валидирането на полезността на in vitro моделите.
IPHASE създаде три категории HepatoMax™, HepatoCon™ и стромални клетки, за да определи метаболитната стабилност на толбутимид за период от 80 часа, използвайки като пример прилепнали първични човешки хепатоцити, които бяха приложени 3 дни след реанимация на първичнияхепатоцитs, и резултатите показаха, че и дветеIPHASE-HepatoMax™ иIPHASE-HepatoCon™ и двете системи показаха стабилна активност на метаболитен клирънс в рамките на най-дългата стойност от времето на анализа.
В обобщение, IPHASE, като лидер в ин витро био-реагентите, се развиIPHASE HepatoMax™ иIPHASE HepatoCon™ in vitro модели, базирани на стена-приложен първичен човек, маймуна, куче, плъх и мишкахепатоцитs и стромални клетки от различни родове, с отличен метаболитен обмен, активни ензимни дейности и мощни метаболитни клирънс дейности, които предлагат нови възможности за избор на нашите клиенти за разработване на лекарства с нисък-клирънс и са незаменим партньор за реализиране на откриването на лекарства! TheIPHASE HepatoMax™ иIPHASE HepatoCon™ in vitro моделите предлагат отлични скорости на метаболитен оборот, активни ензимни дейности и силни метаболитни клирънс дейности, предоставяйки нови възможности за клиентите за разработване на лекарства с нисък-клирънс, и са важен партньор в откриването на лекарства!
Справка:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019 (2): 152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Нов релеен метод за определяне на ниски стойности на клирънс [J]. Лекарствен метаболизъм и разпределение, 2012, 40 (9): 1860-1865.
Време на публикуване: 2024-07-19 17:20:41