مدل جدید متابولیسم هپاتوسیت در شرایط آزمایشگاهی مطالعات فارماکوکینتیک آهسته و متابولیزه کننده را تسهیل می کند

از آنجایی که فعالیت آنزیم متابولیزه کننده دارو به تدریج با طولانی شدن زمان انکوباسیون در شرایط آزمایشگاهی کاهش می یابد، مدل های متابولیسم آزمایشگاهی سنتی دارای محدودیت هایی مانند زمان انکوباسیون کوتاه، تبدیل متابولیک پایین و حد پایین تشخیص بالا هستند (حد پایین کمی سنجش CLint 2.5 میکرولیتر / (دقیقه 106 سلول) است)، که نمی تواند به طور دقیق متابولیسم دارو را به طور دقیق نشان دهد.^[1]. در همین حال،هپاتوسیتs دارای آنزیم های بیشتری برای واکنش های اکسیداسیون، احیا، هیدرولیز و دیمر شدن در مقایسه بامیکروزوم های کبدیو در سیستم‌های in vitro، بسیاری از مدل‌های جدید بر اساس بهینه‌سازی می‌شوندهپاتوسیت سیستم و بیشتر از محیط in vivo تقلید کنید تا حفظ فعالیت آنزیم در آن طولانی شودهپاتوسیتs، و طولانی شدن زمان انکوباسیون امکان نظارت بر تحول متابولیکی کافی داروهای آهسته متابولیسم را فراهم می کند.^[1،2].

با توجه به این موضوع، IPHASE، به‌عنوان پیشرو در معرف‌های بیولوژیکی برای تحقیقات آزمایشگاهی، پیشگام سیستم HepatoMax™ و سیستم رسانه‌ای HepatoCon™ مبتنی بر مطالعه سلول‌های کبدی اولیه و سلول‌های استرومایی از جنس‌های مختلف، از جمله انسان، میمون، سگ سگ، موش صحرایی، موش، و غیره است.هپاتوسیتبه عنوان مثال، و هر دو سیستم برای تعیین فعالیت و پایداری متابولیک انواع آنزیم خاص و افزایش ارزش پاسخ متابولیت‌های داروی تولبوتامید در 10 روز و 7 روز برای تأیید سیستم‌ها راه‌اندازی شدند. متابولیت ارزش پاسخ را در 10 روز افزایش می دهد و فعالیت و پایداری متابولیک انواع آنزیم خاص در 7 روز برای اعتبارسنجی سیستم ها تعیین شد.

• (1) دو فرآیند کشت سیستماتیک اعتبار سنجی دارو به شرح زیر است:

  IPHASE-HepatoMax™یک سیستم هم‌کشتی از سلول‌های کبدی اولیه انسان با دیواره منجمد و سلول‌های استرومایی است. سلول‌های کبدی اولیه انسانی احیا شدند و با سلول‌های استرومایی در محیط HepatoP™ به مدت 3 روز انکوبه شدند تا سنجش تجویز دارو آغاز شود، و متابولیسم دارو در محیط HepatoDo بدون سرم، که فقط با دارو بدون تغییر محیط پر می‌شد، انجام شد. در مجموع 4، 72، 168 و 240 ساعت پس از تجویز دارو، ارزش افزوده متابولیت های دارو برای تجزیه و تحلیل تعیین شد.

 

  IPHASE-HepatoCon™از سوی دیگر، سیستمی برای کشت سلولهای کبدی اولیه انسان منجمد چسبنده در محیط HepatoCon™ است. پس از احیای انسان اولیههپاتوسیتs، سنجش تجویز دارو پس از 3 روز کشت تنها در محیط HepatoCon™ انجام شد و زمان مصرف بعدی، سیستم کشت و روش سنجش همانند سیستم HepatoMax™ بود.

 

در همین حال، برای اطمینان از صحت و دقت نتایج، IPHASE یک کنترل متوسط (سلول-آزاد) و یک کنترل سلول استرومایی را همزمان با سه تکرار انجام داد و نتایج نشان داد کهIPHASE-HepatoMax™ وIPHASE-HepatoCon™ سیستم‌ها از روز 3 به بعد یک پاسخ متابولیت اوج قوی تولید کردند و هر دو نرخ گردش متابولیک قوی را نشان دادند.

 

 

• (2) متابولیسم دارو عمدتاً به سلولهای کبدی وابسته استCYP450سیستم آنزیمی، و فعالیت آن را می توان برای بررسی بهتر اندازه گیری کرد.

اینIPHASE-HepatoMax™ وIPHASE-HepatoCon™ سیستم ها کاربرد خوبی دارند.

IPHASE چهار دسته کنترل متوسط ​​(بدون سلول)، HepatoMax™، HepatoCon™ و سلول های استرومایی را تنظیم می کند. با استفاده از دیوار - انسان اولیه چسبندههپاتوسیتبه عنوان مثال، متابولیت افزایش مقادیرCYP1A2, CYP2B6وCYP3A4در روزهای 0، 3 و 7 پس از آن تأیید شدهپاتوسیتبازیابی به مدت 3 روز با استفاده از فیناستراید، بوپروپیون و میدازولام به عنوان بستر. مقادیر افزایش متابولیت نشان داد که هر دوIPHASE-HepatoMax™ وIPHASE-HepatoCon™ سیستم‌ها فعالیت آنزیمی فعال را در روز 7 نشان دادند، که به طور مداوم متابولیسم طبیعی دارو را ارتقا می‌داد.

 

• (3) علاوه بر اعتبارسنجی فعالیت آنزیم، پایداری متابولیک خوب نیز یک مرحله مهم و ضروری در اعتبارسنجی کاربرد مدل‌های آزمایشگاهی است.

IPHASE سه دسته از سلول‌های HepatoMax، HepatoCon و استرومایی را برای تعیین پایداری متابولیک تولبوتیمید در مدت 80 ساعت با استفاده از سلول‌های کبدی اولیه انسانی به عنوان مثال، که 3 روز پس از احیای اولیه تجویز شد، تنظیم کرد.هپاتوسیتs، و نتایج نشان داد که هر دوIPHASE-HepatoMax™ وIPHASE-HepatoCon™ هر دو سیستم فعالیت کلیرانس متابولیکی قوی را در طولانی‌ترین مقدار زمان سنجش نشان دادند.

 

به طور خلاصه، IPHASE، به عنوان یک رهبر در in vitro bio-reagents، توسعه یافته استIPHASE HepatoMax™ وIPHASE HepatoCon™ مدل‌های آزمایشگاهی مبتنی بر دیوار-کاربردی انسان اولیه، میمون، سگ، موش و موشهپاتوسیتسلول های s و استرومایی از جنس های مختلف، با گردش متابولیک عالی، فعالیت های آنزیمی فعال و فعالیت های پاکسازی متابولیک قدرتمند، که انتخاب های جدیدی را برای مشتریان ما برای تولید داروهای با ترخیص پایین ارائه می دهد و شریکی ضروری برای کشف دارو هستند! اینIPHASE HepatoMax™ وIPHASE HepatoCon™ مدل‌های in vitro نرخ گردش متابولیک عالی، فعالیت‌های آنزیمی فعال و فعالیت‌های پاکسازی متابولیک قوی را ارائه می‌دهند، گزینه‌های جدیدی را برای مشتریان برای تولید داروهای با ترخیص پایین ارائه می‌دهند و شریک مهمی در کشف دارو هستند!

 

مرجع:

[1]阮婷婷،鞠武建،熊海伟،等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报، 2019 (2): 152-160.

[2] Di L، Trapa P، Obach R S، و همکاران. یک روش رله جدید برای تعیین مقادیر کم-ترخیص[J]. متابولیسم و ​​وضعیت دارو، 2012، 40(9): 1860-1865.