Dado que as actividades enzimáticas que metabolizan os fármacos diminúen gradualmente coa prolongación do tempo de incubación in vitro, os modelos tradicionais de metabolismo in vitro teñen limitacións como o tempo de incubación curto, a baixa conversión metabólica e o límite inferior alto de detección (o límite inferior cuantitativo do ensaio CLint é de 2,5 μL /(min·106 células)), que non poden predecir con precisión CLint dos fármacos metabolizados lentamente.[1]. Mentres tanto,hepatocitos teñen máis encimas necesarios para as reaccións de oxidación, redución, hidrólise e dimerización en comparación conmicrosomas hepáticos, e nos sistemas in vitro, moitos modelos novos tenden a optimizarse baseándose nohepatocito sistema e imitar aínda máis o ambiente in vivo para prolongar a retención da actividade enzimáticahepatocitos, e a prolongación do tempo de incubación ofrece a posibilidade de controlar a suficiente transformación metabólica de fármacos de metabolización lenta.[1,2].
En vista diso, IPHASE, como líder en reactivos biolóxicos para a investigación in vitro, foi pioneiro no sistema HepatoMax™ e HepatoCon™ Media System baseado no estudo de hepatocitos primarios adherentes e células do estroma de varios xéneros, incluíndo humanos, monos, caninos, ratas e ratos, etc.hepatocitos como exemplo, e ambos sistemas foron configurados para a determinación da actividade e estabilidade metabólica de tipos específicos de encimas e o aumento do valor de resposta dos metabolitos do fármaco tolbutamida aos 10 días e 7 días para verificar os sistemas. O valor de resposta do metabolito aumenta aos 10 días e determinouse a actividade e a estabilidade metabólica de tipos específicos de encimas aos 7 días para validar os sistemas.
- (1) Os dous procesos sistemáticos de cultivo de validación de fármacos son os seguintes:
IPHASE-HepatoMax™é un sistema de co-cultivo de hepatocitos humanos primarios con paredes conxeladas e células do estroma. Os hepatocitos humanos primarios foron reanimados e incubáronse con células estromales en medio HepatoP™ durante 3 días para iniciar o ensaio de administración do fármaco, e o metabolismo do fármaco realizouse en medio HepatoDo™ sen soro - que se repuxo só co fármaco sen cambiar o medio. Un total de 4, 72, 168 e 240 horas despois da administración do fármaco, determinouse o valor engadido dos metabolitos do fármaco para a súa análise.
IPHASE-HepatoCon™, por outra banda, é un sistema para o cultivo de hepatocitos humanos primarios adherentes conxelados en medio HepatoCon™. Despois de reanimar o humano primariohepatocitos, o ensaio de administración de fármacos realizouse despois de 3 días de cultivo só en medio HepatoCon™, e o tempo posterior de administración, o sistema de cultivo e a metodoloxía de ensaio foron os mesmos que os do sistema HepatoMax™.
Mentres tanto, para garantir a precisión e o rigor dos resultados, IPHASE realizou un control medio (cell-free) e un control de células estromales ao mesmo tempo, con tres replicacións, e os resultados mostraron que oIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ Os sistemas produciron unha forte resposta metabólica máxima a partir do día 3 e que ambos mostraron unha forte taxa de recambio metabólico.
- (2) O metabolismo dos fármacos depende principalmente do hepatocitoCYP450sistema enzimático, e a súa actividade pódese medir para examinala mellor.
OIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ sistemas teñen unha boa aplicabilidade.
IPHASE estableceu catro categorías de control medio (sen células), HepatoMax™, HepatoCon™ e células estromales. Usando un home primario adherente ao murohepatocitos como exemplo, o metabolito aumenta os valores deCYP1A2, CYP2B6eCYP3A4Verificáronse os días 0, 3 e 7 despoishepatocitorecuperación durante 3 días usando finasterida, bupropión e midazolam como substratos, respectivamente. Os valores de aumento do metabolito mostraron que ambosIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ Os sistemas mostraron actividade enzimática activa no día 7, promovendo constantemente o metabolismo normal do fármaco.
- (3) Ademais da validación da actividade enzimática, unha boa estabilidade metabólica tamén é un paso importante e indispensable para validar a utilidade dos modelos in vitro.
IPHASE estableceu tres categorías de células HepatoMax™, HepatoCon™ e estromales para determinar a estabilidade metabólica da tolbutimida durante un período de 80 horas usando como exemplo hepatocitos humanos primarios adherentes, que se administraron 3 días despois da reanimación primaria.hepatocitos, e os resultados mostraron que tanto oIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ ambos os sistemas mostraron unha actividade de eliminación metabólica robusta no valor máis longo do tempo de ensaio.
En resumo, IPHASE, como líder en bio-reactivos in vitro, desenvolveuseIPHASE HepatoMax™ eIPHASE HepatoCon™ modelos in vitro baseados en parede-primario aplicado humano, mono, canino, rata e ratohepatocitos e células do estroma de varios xéneros, con excelente rotación metabólica, actividades enzimáticas activas e poderosas actividades de eliminación metabólica, que ofrecen novas opcións para que os nosos clientes desenvolvan fármacos de baixo - OIPHASE HepatoMax™ eIPHASE HepatoCon™ Os modelos in vitro ofrecen excelentes taxas de rotación metabólica, actividades enzimáticas activas e fortes actividades de eliminación metabólica, proporcionando novas opcións para que os clientes desenvolvan fármacos de baixa eliminación e son un socio importante no descubrimento de fármacos.
Referencia:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Un método de relé novedoso para determinar valores baixos de holgura[J]. Metabolismo e disposición de drogas, 2012, 40(9): 1860-1865.
Hora da publicación: 2024-07-19 17:20:41