Vzhledem k tomu, že aktivity enzymů metabolizujících léčiva postupně klesají s prodlužováním in vitro inkubační doby, tradiční modely metabolismu in vitro mají omezení, jako je krátká inkubační doba, nízká metabolická konverze a vysoký spodní limit detekce (kvantitativní spodní limit testu CLint je 2,5 μl /(min·106 buněk)), což nemůže přesně předpovědět CLint pomalu metabolizovaných léků[1]. mezitímhepatocyts mají více enzymů potřebných pro oxidaci, redukci, hydrolýzu a dimerizační reakce ve srovnání sjaterní mikrozomya v systémech in vitro má mnoho nových modelů tendenci být optimalizováno na základěhepatocyt systému a dále napodobují prostředí in vivo, aby se prodloužila retence enzymové aktivity vhepatocyts a prodloužení inkubační doby poskytuje možnost sledovat dostatečnou metabolickou transformaci pomalu metabolizujících léků[1,2].
S ohledem na to IPHASE, jako lídr v oblasti biologických činidel pro výzkum in vitro, je průkopníkem systému HepatoMax™ a systému médií HepatoCon™ založených na studiu adherentních primárních hepatocytů a stromálních buněk různých rodů, včetně lidských, opičích, psích, potkaních a myších atd. Systém HepatoMax™ Media System a primární systém HepatoCon™ byly vyvinutyhepatocyts jako příklad a oba systémy byly nastaveny pro stanovení aktivity a metabolické stability specifických typů enzymů a zvýšení hodnoty odezvy metabolitů léčiva tolbutamidu po 10 dnech a 7 dnech pro ověření systémů. Pro validaci systémů byla stanovena hodnota odezvy zvýšení metabolitu po 10 dnech a aktivita a metabolická stabilita specifických typů enzymů po 7 dnech.
- (1) Dva systematické procesy kultivace léčiva jsou následující:
IPHASE-HepatoMax™je ko-kultivační systém zmražených primárních lidských hepatocytů a stromálních buněk. Primární lidské hepatocyty byly resuscitovány a inkubovány s buňkami stromatu v médiu HepatoP™ po dobu 3 dnů pro zahájení testu podávání léku a metabolismus léku byl prováděn v médiu HepatoDo™ bez séra, které bylo doplněno pouze lékem bez výměny média. Celkem 4, 72, 168 a 240 hodin po podání léčiva byla pro analýzu stanovena přidaná hodnota metabolitů léčiva.
IPHASE-HepatoCon™na druhé straně je systém pro kultivaci zmrazených adherentních primárních lidských hepatocytů v médiu HepatoCon™. Po resuscitaci primárního člověkahepatocytTest podávání léku byl proveden po 3 dnech kultivace v samotném médiu HepatoCon™ a následná doba podávání, kultivační systém a metodologie testu byly stejné jako u systému HepatoMax™.
Mezitím, aby byla zajištěna přesnost a přesnost výsledků, provedla IPHASE současně kontrolu média (bez buněk) a kontrolu buněk stromatu se třemi replikacemi a výsledky ukázaly, žeIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ systémy produkovaly silnou špičkovou metabolitovou odezvu od 3. dne dále a že oba vykazovaly silnou rychlost metabolického obratu.
- (2) Metabolismus léčiv je závislý hlavně na hepatocytech450 CYPenzymového systému a jeho aktivitu lze pro lepší vyšetření měřit.
TheIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ systémy mají dobrou použitelnost.
IPHASE nastavil čtyři kategorie kontrolních médií (žádné buňky), HepatoMax™, HepatoCon™ a stromální buňky. Použití primárního člověka přilnutého ke zdihepatocyts jako příklad zvýšení hodnot metabolitůCYP1A2, CYP2B6aCYP3A4byly ověřeny v den 0, 3 a 7 potéhepatocytzotavení po dobu 3 dnů za použití finasteridu, bupropionu a midazolamu jako substrátů, v daném pořadí. Hodnoty zvýšení metabolitů ukázaly, že obojíIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ systémy vykazovaly aktivní enzymovou aktivitu do 7. dne, konzistentně podporovaly normální metabolismus léčiv.
- (3) Kromě ověření enzymové aktivity je důležitým a nezbytným krokem při ověřování užitečnosti modelů in vitro také dobrá metabolická stabilita.
IPHASE vytvořila tři kategorie buněk HepatoMax™, HepatoCon™ a stromálních buněk pro stanovení metabolické stability tolbutimidu po dobu 80 hodin za použití adherentních primárních lidských hepatocytů jako příkladu, které byly podávány 3 dny po resuscitaci primárních buněk.hepatocyts a výsledky ukázaly, že obaIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ oba systémy vykazovaly silnou metabolickou clearance aktivitu v nejdelší hodnotě doby testu.
Stručně řečeno, IPHASE, jako lídr v oblasti bio-reagentů in vitro, se vyvinulIPHASE HepatoMax™ aIPHASE HepatoCon™ in vitro modely založené na nástěnných primárních lidech, opicích, psovi, potkanech a myšíchhepatocyts a stromálními buňkami různých rodů, s vynikajícím metabolickým obratem, aktivními enzymovými aktivitami a silnými metabolickými clearancemi, které našim zákazníkům nabízejí nové možnosti pro vývoj léků s nízkou clearance a jsou nepostradatelným partnerem pro realizaci objevů léků! TheIPHASE HepatoMax™ aIPHASE HepatoCon™ modely in vitro nabízejí vynikající rychlost metabolického obratu, aktivní enzymové aktivity a silné metabolické clearance, poskytují zákazníkům nové možnosti pro vývoj léků s nízkou clearance a jsou důležitým partnerem při objevování léků!
Reference:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R. S. a kol. Nová reléová metoda pro určování hodnot nízkých-vůlí[J]. Metabolismus a dispozice léčiv, 2012, 40(9): 1860-1865.
Čas příspěvku: 2024-07-19 17:20:41