Ny in vitro hepatocyttmetabolismemodell letter farmakokinetiske studier med sakte metabolisme

Siden de medikamentmetaboliserende enzymaktivitetene gradvis avtar med forlengelsen av in vitro-inkubasjonstiden, har tradisjonelle in vitro-metabolismemodeller begrensninger som kort inkubasjonstid, lav metabolsk omdannelse og høy nedre deteksjonsgrense (den kvantitative nedre grensen for CLint-analysen er 2,5 μL /(min·106 celler)), som ikke kan forutsi nøyaktig CLint-medikamenter av sakte metaboliserte.^[1]. I mellomtiden,hepatocytts har flere enzymer som kreves for oksidasjon, reduksjon, hydrolyse og dimeriseringsreaksjoner sammenlignet medlevermikrosomer, og in vitro-systemer har mange nye modeller en tendens til å bli optimalisert basert påhepatocytt system og videre etterligne in vivo-miljøet for å forlenge retensjonen av enzymaktivitet ihepatocytts, og forlengelsen av inkubasjonstiden gir muligheten til å overvåke tilstrekkelig metabolsk transformasjon av sakte metaboliserende legemidler^[1,2].

I lys av dette har IPHASE, som en leder innen biologiske reagenser for in vitro-forskning, vært banebrytende for HepatoMax™ System og HepatoCon™ Media System basert på studiet av adherente primære hepatocytter og stromaceller av forskjellige slekter, inkludert mennesker, aper, hunder, rotter og mus, etc.hepatocytts som et eksempel, og begge systemene ble satt opp for bestemmelse av aktiviteten og metabolsk stabilitet til spesifikke enzymtyper og økningen i responsverdien til metabolitter av stoffet tolbutamid etter 10 dager og 7 dager for å verifisere systemene. Metabolitt øker responsverdien etter 10 dager og aktivitet og metabolsk stabilitet til spesifikke enzymtyper etter 7 dager ble bestemt for å validere systemene.

• (1) De to systematiske legemiddelvalideringskulturprosessene er som følger:

  IPHASE-HepatoMax™er et samkultursystem av frosne vegger primære humane hepatocytter og stromaceller. Primære humane hepatocytter ble gjenopplivet og inkubert med stromaceller i HepatoP™-medium i 3 dager for å starte medikamentadministreringsanalysen, og metabolismen av medikamentet ble utført i serum-fritt HepatoDo™-medium, som kun ble etterfylt med medikamentet uten å endre mediet. Totalt 4, 72, 168 og 240 timer etter medikamentadministrering ble verdiøkningen av legemiddelmetabolitter bestemt for analyse.

 

  IPHASE-HepatoCon™, på den annen side, er et system for dyrking av frosne adherente primære humane hepatocytter i HepatoCon™-medium. Etter å ha gjenopplivet det primære menneskethepatocytts ble medikamentadministreringsanalysen utført etter 3 dagers dyrking i HepatoCon™-medium alene, og det påfølgende tidspunktet for administrering var kultursystemet og analysemetodikken de samme som for HepatoMax™-systemet.

 

I mellomtiden, for å sikre nøyaktigheten og strengheten til resultatene, utførte IPHASE en mediumkontroll (cellefri) og en stromalcellekontroll på samme tid, med tre replikasjoner, og resultatene viste atIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer produserte en sterk topp metabolittrespons fra dag 3 og utover, og at de begge viste en sterk metabolsk omsetningshastighet.

 

 

• (2) Legemiddelmetabolismen er hovedsakelig avhengig av hepatocyttenCYP450enzymsystemet, og dets aktivitet kan måles for bedre å undersøke.

DenIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer har god anvendelighet.

IPHASE satte opp fire kategorier av mediumkontroll (ingen celler), HepatoMax™, HepatoCon™ og stromaceller. Bruker vegg-vedhengende primærmenneskehepatocytts som et eksempel, metabolitten øke verdiene avCYP1A2, CYP2B6ogCYP3A4ble verifisert på dag 0, 3 og 7 etterhepatocyttrestitusjon i 3 dager ved bruk av henholdsvis finasterid, bupropion og midazolam som underlag. Metabolittøkningsverdier viste at beggeIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer viste aktiv enzymaktivitet på dag 7, og fremmet konsekvent normal legemiddelmetabolisme.

 

• (3) I tillegg til validering av enzymaktivitet, er god metabolsk stabilitet også et viktig og uunnværlig skritt for å validere nytten av in vitro-modeller.

IPHASE satte opp tre kategorier av HepatoMax™, HepatoCon™ og stromaceller for å bestemme den metabolske stabiliteten til Tolbutimid over en periode på 80 timer ved å bruke adherente primære humane hepatocytter som et eksempel, som ble administrert 3 dager etter gjenoppliving av primære leverceller.hepatocytts, og resultatene viste at bådeIPHASE-HepatoMax™ ogIPHASE-HepatoCon™ systemer viste begge robust metabolsk clearance-aktivitet innenfor den lengste verdien av analysetiden.

 

Oppsummert har IPHASE, som en leder innen in vitro bio-reagenser, utviklet segIPHASE HepatoMax™ ogIPHASE HepatoCon™ in vitro-modeller basert på vegg-påført primær menneske, ape, hund, rotte og mushepatocytts og stromaceller av ulike slekter, med utmerket metabolsk omsetning, aktive enzymaktiviteter og kraftige metabolske clearance-aktiviteter, som tilbyr nye valg for våre kunder å utvikle lav-clearance-medisiner, og er en uunnværlig partner for å realisere legemiddeloppdagelsen! DenIPHASE HepatoMax™ ogIPHASE HepatoCon™ in vitro-modeller tilbyr utmerket metabolsk omsetningshastighet, aktive enzymaktiviteter og sterke metabolske clearance-aktiviteter, og gir nye muligheter for kunder til å utvikle lav-clearance-medisiner, og er en viktig partner i legemiddeloppdagelse!

 

Referanse:

[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.

[2] Di L, Trapa P, Obach RS, et al. En ny relémetode for å bestemme lave-klareringsverdier[J]. Legemiddelmetabolisme og disposisjon, 2012, 40(9): 1860-1865.