Novel in vitro hepatocyte metabolism na modelo ay nagpapadali sa mabagal na pag-metabolize ng mga pharmacokinetic na pag-aaral

Dahil unti-unting bumababa ang mga aktibidad ng enzyme na nag-metabolize ng gamot kasabay ng pagpapahaba ng in vitro incubation time, ang mga tradisyonal na in vitro metabolism na modelo ay may mga limitasyon tulad ng maikling oras ng incubation, mababang metabolic conversion at mataas na mas mababang limitasyon ng detection (ang quantitative lower limit ng CLint assay ay 2.5 μL /( min·106 cells)), na hindi tumpak na mahulaan ang CLint ng mga gamot^[1]. Samantala,hepatocytes ay may mas maraming enzyme na kinakailangan para sa oksihenasyon, pagbabawas, hydrolysis at dimerization reaksyon kumpara samicrosome sa atay, at sa mga in vitro system, maraming mga nobelang modelo ang may posibilidad na ma-optimize batay sahepatocyte system at higit pang gayahin ang in vivo na kapaligiran upang pahabain ang pagpapanatili ng aktibidad ng enzyme sahepatocytes, at ang pagpapahaba ng oras ng pagpapapisa ng itlog ay nagbibigay ng posibilidad na masubaybayan ang sapat na pagbabagong-anyo ng metabolic ng mga mabagal na metabolizing na gamot^[1,2].

Dahil dito, ang IPHASE, bilang nangunguna sa mga biological reagents para sa in vitro research, ay nagpayunir sa HepatoMax™ System at HepatoCon™ Media System batay sa pag-aaral ng mga sumusunod na pangunahing hepatocytes at stromal cells ng iba't ibang genera, kabilang ang tao, unggoy, aso, daga, at daga, atbp. Ang HepatoMax™ System ay binuo gamit ang isang pangunahing Sistema ng Media at Hedherent.hepatocytes bilang isang halimbawa, at ang parehong mga sistema ay na-set up para sa pagpapasiya ng aktibidad at metabolic stability ng mga partikular na uri ng enzyme at ang pagtaas sa halaga ng tugon ng mga metabolite ng gamot na tolbutamide sa 10 araw at 7 araw upang i-verify ang mga system. Ang pagtaas ng halaga ng tugon ng metabolite sa 10 araw at ang aktibidad at metabolic na katatagan ng mga partikular na uri ng enzyme sa 7 araw ay natukoy upang mapatunayan ang mga system.

• (1) Ang dalawang sistematikong proseso ng kultura ng pagpapatunay ng gamot ay ang mga sumusunod:

  IPHASE-HepatoMax™ay isang co-culture system ng frozen walled primary human hepatocytes at stromal cells. Ang mga pangunahing hepatocyte ng tao ay na-resuscitate at na-incubate gamit ang mga stromal cells sa HepatoP™ medium sa loob ng 3 araw upang simulan ang drug administration assay, at ang metabolismo ng gamot ay isinagawa sa serum-free HepatoDo™ medium, na nilagyan lamang ng gamot nang hindi binabago ang medium. Isang kabuuan ng 4, 72, 168 at 240 na oras pagkatapos ng pangangasiwa ng gamot, ang halaga ng idinagdag ng mga metabolite ng gamot ay natukoy para sa pagsusuri.

 

  IPHASE-HepatoCon™, sa kabilang banda, ay isang sistema para sa pag-kultura ng frozen adherent primary human hepatocytes sa HepatoCon™ medium. Matapos buhayin ang pangunahing taohepatocytes, ang pagsusuri ng pangangasiwa ng gamot ay isinagawa pagkatapos ng 3 araw ng kultura sa medium ng HepatoCon™ lamang, at ang kasunod na oras ng pangangasiwa, ang sistema ng kultura at ang pamamaraan ng pagsusuri ay kapareho ng sa sistema ng HepatoMax™.

 

Samantala, upang matiyak ang katumpakan at higpit ng mga resulta, ang IPHASE ay nagsagawa ng isang medium control (cell-free) at isang stromal cell control sa parehong oras, na may tatlong replikasyon, at ang mga resulta ay nagpakita na angIPHASE-HepatoMax™ atIPHASE-HepatoCon™ Ang mga system ay gumawa ng isang malakas na tugon ng peak metabolite mula araw 3 pataas, at pareho silang nagpakita ng isang malakas na metabolic turnover rate.

 

 

• (2) Ang metabolismo ng droga ay pangunahing nakadepende sa hepatocyteCYP450enzyme system, at ang aktibidad nito ay maaaring masukat upang mas mahusay na masuri.

AngIPHASE-HepatoMax™ atIPHASE-HepatoCon™ ang mga sistema ay may mahusay na kakayahang magamit.

Nag-set up ang IPHASE ng apat na kategorya ng medium control (walang mga cell), HepatoMax™, HepatoCon™ at stromal cells. Paggamit ng pader-adherent pangunahing taohepatocytes bilang isang halimbawa, ang metabolite ay nagdaragdag ng mga halaga ngCYP1A2, CYP2B6atCYP3A4ay na-verify sa araw 0, 3 at 7 pagkataposhepatocytepagbawi sa loob ng 3 araw gamit ang finasteride, bupropion at midazolam bilang mga substrate, ayon sa pagkakabanggit. Ang mga halaga ng pagtaas ng metabolite ay nagpakita na parehoIPHASE-HepatoMax™ atIPHASE-HepatoCon™ Ang mga system ay nagpakita ng aktibong aktibidad ng enzyme sa ika-7 araw, na patuloy na nagtataguyod ng normal na metabolismo ng gamot.

 

• (3) Bilang karagdagan sa pagpapatunay ng aktibidad ng enzyme, ang magandang metabolic stability ay isa ring mahalaga at kailangang-kailangan na hakbang sa pagpapatunay ng utility ng in vitro models.

Nag-set up ang IPHASE ng tatlong kategorya ng HepatoMax™, HepatoCon™ at stromal cells upang matukoy ang metabolic stability ng Tolbutimide sa loob ng 80 oras gamit ang mga sumusunod na pangunahing hepatocytes ng tao bilang isang halimbawa, na pinangangasiwaan 3 araw pagkatapos ng resuscitation ng primaryhepatocytes, at ang mga resulta ay nagpakita na pareho angIPHASE-HepatoMax™ atIPHASE-HepatoCon™ Ang mga system ay parehong nagpakita ng matatag na aktibidad ng metabolic clearance sa loob ng pinakamahabang halaga ng oras ng assay.

 

Sa buod, ang IPHASE, bilang nangunguna sa in vitro bio-reagents, ay nabuoIPHASE HepatoMax™ atIPHASE HepatoCon™ in vitro models batay sa wall-applied primary human, monkey, canine, rat at mousehepatocytes at stromal cells ng iba't ibang genera, na may mahusay na metabolic turnover, aktibong enzyme na aktibidad at malakas na metabolic clearance na aktibidad, na nag-aalok ng mga bagong pagpipilian para sa aming mga customer na bumuo ng mga low-clearance na gamot, at isang kailangang-kailangan na kasosyo upang maisakatuparan ang pagtuklas ng droga! AngIPHASE HepatoMax™ atIPHASE HepatoCon™ Ang mga in vitro na modelo ay nag-aalok ng mahusay na metabolic turnover rate, aktibong enzyme na aktibidad at malakas na metabolic clearance na aktibidad, na nagbibigay ng mga bagong opsyon para sa mga customer na bumuo ng mga low-clearance na gamot, at isang mahalagang kasosyo sa pagtuklas ng droga!

 

Sanggunian:

[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.

[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Isang bagong paraan ng relay para sa pagtukoy ng mababang-mga halaga ng clearance[J]. Ang metabolismo at disposisyon ng droga, 2012, 40(9): 1860-1865.