Mivel a gyógyszert metabolizáló enzimek aktivitása az in vitro inkubációs idő meghosszabbodásával fokozatosan csökken, a hagyományos in vitro metabolizmus modelleknek olyan korlátai vannak, mint például a rövid inkubációs idő, az alacsony metabolikus konverzió és a magas alsó kimutatási határ (a CLint vizsgálat kvantitatív alsó határa 2,5 μL /( min · 106 sejt)), amelyek nem tudják pontosan megjósolni a lassan metabolizálódó gyógyszerek CLintjét.[1]. Eközbenhepatocitas több enzimre van szükség az oxidációs, redukciós, hidrolízis és dimerizációs reakciókhoz képestmáj mikroszómák, és in vitro rendszerekben sok új modellt általában ahepatocita rendszert, és tovább utánozzák az in vivo környezetet, hogy meghosszabbítsák az enzimaktivitás megtartásáthepatocitas, és az inkubációs idő meghosszabbítása lehetőséget ad a lassan metabolizálódó gyógyszerek megfelelő metabolikus átalakulásának nyomon követésére.[1,2].
Ennek fényében az IPHASE, mint az in vitro kutatáshoz használt biológiai reagensek piacvezetője, úttörő szerepet játszott a HepatoMax™ rendszerben és a HepatoCon™ Media Systemben, amely különböző nemzetségek, köztük ember, majom, kutya, patkány és egér stb. tapadó primer hepatocitáinak és stromasejteknek a vizsgálatán alapul.hepatocitas példaként, és mindkét rendszert specifikus enzimtípusok aktivitásának és metabolikus stabilitásának, valamint a tolbutamid hatóanyag metabolitjainak válaszértékének 10. és 7. napos válaszértékének meghatározására állítottuk fel a rendszerek ellenőrzésére. A rendszerek validálása érdekében meghatároztuk a metabolit növekedési válaszértéket 10 napon, és meghatározott enzimtípusok aktivitását és metabolikus stabilitását 7 napon.
- (1) A két szisztematikus gyógyszervalidálási kultúra a következő:
IPHASE-HepatoMax™fagyott falú primer humán hepatociták és stromasejtek együttes tenyésztési rendszere. A primer humán hepatocitákat újraélesztettük és stromasejtekkel HepatoP™ tápközegben 3 napig inkubáltuk a gyógyszeradagolási vizsgálat megkezdéséhez, és a gyógyszer metabolizmusát szérummentes HepatoDo™ tápközegben végeztük, amelyet csak a gyógyszerrel töltöttünk fel a táptalaj cseréje nélkül. Összesen 4, 72, 168 és 240 órával a gyógyszer beadása után határoztuk meg a gyógyszer-metabolitok hozzáadott értékét elemzés céljából.
IPHASE-HepatoCon™másrészt egy rendszer fagyasztott, tapadó primer humán hepatociták tenyésztésére HepatoCon™ tápközegben. Az elsődleges ember újraélesztése utánhepatocitas, a gyógyszerbeadási vizsgálatot 3 napos tenyésztés után végeztük egyedül HepatoCon™ tápközegben, és az ezt követő adagolás időpontja, a tenyésztési rendszer és a vizsgálati módszertan megegyezett a HepatoMax™ rendszerével.
Eközben az eredmények pontosságának és szigorúságának biztosítása érdekében az IPHASE egyidejűleg, három ismétléssel végzett tápközeg kontrollt (sejt-mentes) és stroma sejt kontrollt, és az eredmények azt mutatták, hogy aIPHASE-HepatoMax™ ésIPHASE-HepatoCon™ rendszerek erős csúcs metabolit választ produkáltak a 3. naptól kezdődően, és mindkettő erős metabolikus átalakulási sebességet mutatott.
- (2) A gyógyszeranyagcsere főként a hepatocitáktól függCYP450enzimrendszert, és aktivitása mérhető a jobb vizsgálat érdekében.
AIPHASE-HepatoMax™ ésIPHASE-HepatoCon™ rendszerek jól alkalmazhatók.
Az IPHASE négy kategóriát állított be a tápközeg szabályozására (nincs sejt), a HepatoMax™, a HepatoCon™ és a stromasejtekre. Fal-tapadó elsődleges ember használatahepatocitas például a metabolit növekedési értékeitCYP1A2, CYP2B6ésCYP3A4a 0., 3. és 7. napon ellenőriztékhepatocita3 napon keresztül finasterid, bupropion és midazolam szubsztrát alkalmazásával. A metabolit növekedési értékek azt mutatták, hogy mindkettőIPHASE-HepatoMax™ ésIPHASE-HepatoCon™ rendszerek aktív enzimaktivitást mutattak a 7. napon, következetesen elősegítve a normális gyógyszeranyagcserét.
- (3) Az enzimaktivitás validálása mellett a jó metabolikus stabilitás is fontos és nélkülözhetetlen lépés az in vitro modellek használhatóságának validálásában.
Az IPHASE a HepatoMax™, HepatoCon™ és a stromasejtek három kategóriáját állította fel a tolbutimid metabolikus stabilitásának meghatározására 80 órán keresztül, példaként a tapadó primer humán hepatociták felhasználásával, amelyeket 3 nappal az elsődleges újraélesztés után adtak be.hepatocitas, és az eredmények azt mutatták, hogy mind aIPHASE-HepatoMax™ ésIPHASE-HepatoCon™ Mindkét rendszer erőteljes metabolikus clearance-aktivitást mutatott a vizsgálati idő leghosszabb értékén belül.
Összefoglalva, az IPHASE, mint vezető szerepet tölt be az in vitro bioreagensek terén, fejlődöttIPHASE HepatoMax™ ésIPHASE HepatoCon™ in vitro modellek fal-alkalmazott elsődleges ember, majom, kutya, patkány és egérhepatocitas és különböző nemzetségbe tartozó stromasejtek, kiváló metabolikus forgalommal, aktív enzimaktivitással és erőteljes metabolikus clearance tevékenységgel, amelyek új választási lehetőséget kínálnak ügyfeleinknek az alacsony clearance-ű gyógyszerek fejlesztésében, és nélkülözhetetlen partnerek a gyógyszerkutatás megvalósításában! AIPHASE HepatoMax™ ésIPHASE HepatoCon™ Az in vitro modellek kiváló anyagcsere-forgalmat, aktív enzimaktivitást és erős metabolikus kiürülési aktivitást kínálnak, új lehetőségeket kínálva az ügyfeleknek az alacsony kiürülésű gyógyszerek fejlesztésére, és fontos partnerek a gyógyszerkutatásban!
Hivatkozás:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R. S. et al. Egy újszerű relé módszer az alacsony szabad távolságok meghatározására[J]. Gyógyszeranyagcsere és diszpozíció, 2012, 40(9): 1860-1865.
Feladás ideje: 2024-07-19 17:20:41