Keďže aktivity enzýmu metabolizujúceho liečivo postupne klesajú s predlžovaním inkubačného času in vitro, tradičné modely metabolizmu in vitro majú obmedzenia, ako je krátky inkubačný čas, nízka metabolická konverzia a vysoký spodný limit detekcie (kvantitatívna spodná hranica testu CLint je 2,5 μl /(min·106 buniek)), ktoré nedokážu presne predpovedať CLint pomaly metabolizovaných liečiv.[1]. medzitýmhepatocyts majú viac enzýmov potrebných na oxidáciu, redukciu, hydrolýzu a dimerizačné reakcie v porovnaní spečeňové mikrozómya v systémoch in vitro majú mnohé nové modely tendenciu byť optimalizované na základehepatocyt systém a ďalej napodobňujú prostredie in vivo, aby sa predĺžila retencia enzýmovej aktivity vhepatocyts a predĺženie inkubačného času poskytuje možnosť monitorovať dostatočnú metabolickú transformáciu pomaly metabolizujúcich liečiv[1,2].
Vzhľadom na to IPHASE, ako líder v oblasti biologických činidiel pre výskum in vitro, je priekopníkom systému HepatoMax™ a systému médií HepatoCon™ založených na štúdiu adherentných primárnych hepatocytov a stromálnych buniek rôznych rodov, vrátane ľudí, opíc, psov, potkanov a myší atď. Systém HepatoMax™ Media System a primárny systém HepatoCon™ boli vyvinutéhepatocyts ako príklad a oba systémy boli nastavené na stanovenie aktivity a metabolickej stability špecifických typov enzýmov a zvýšenie hodnoty odozvy metabolitov liečiva tolbutamidu po 10 dňoch a 7 dňoch na overenie systémov. Na overenie systémov sa stanovila hodnota odozvy zvýšenia metabolitu po 10 dňoch a aktivita a metabolická stabilita špecifických typov enzýmov po 7 dňoch.
- (1) Dva systematické procesy kultivácie na validáciu liekov sú nasledovné:
IPHASE-HepatoMax™je ko-kultivačný systém zamrznutých primárnych ľudských hepatocytov a stromálnych buniek. Primárne ľudské hepatocyty boli resuscitované a inkubované so stromálnymi bunkami v médiu HepatoP™ počas 3 dní, aby sa začal test podávania liečiva, a metabolizmus liečiva sa uskutočňoval v médiu HepatoDo™ bez séra, ktoré bolo doplnené iba liečivom bez výmeny média. Celkovo 4, 72, 168 a 240 hodín po podaní liečiva sa na analýzu stanovila pridaná hodnota metabolitov liečiva.
IPHASE-HepatoCon™, na druhej strane, je systém na kultiváciu zmrazených adherentných primárnych ľudských hepatocytov v médiu HepatoCon™. Po resuscitácii primárneho človekahepatocytTest podávania liečiva sa uskutočnil po 3 dňoch kultivácie v samotnom médiu HepatoCon™ a následný čas podávania, kultivačný systém a metodológia testu boli rovnaké ako pri systéme HepatoMax™.
Medzitým, aby sa zabezpečila presnosť a prísnosť výsledkov, IPHASE vykonala súčasne strednú kontrolu (bez buniek) a kontrolu stromálnych buniek v troch opakovaniach a výsledky ukázali, žeIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ systémy produkovali silnú maximálnu metabolitovú odozvu od 3. dňa a že oba vykazovali silnú rýchlosť metabolického obratu.
- (2) Metabolizmus liečiva závisí hlavne od hepatocytu450 CYPenzýmový systém a jeho aktivita sa dá merať, aby sa lepšie preskúmalo.
TheIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ systémy majú dobrú použiteľnosť.
IPHASE nastavil štyri kategórie kontroly média (bez buniek), HepatoMax™, HepatoCon™ a stromálnych buniek. Použitie primárneho človeka priľnutého k stenehepatocyts ako príklad zvýšenie hodnôt metabolitovCYP1A2, CYP2B6aCYP3A4boli overené v deň 0, 3 a 7 potomhepatocytzotavenie počas 3 dní s použitím finasteridu, bupropiónu a midazolamu ako substrátov, v tomto poradí. Hodnoty zvýšenia metabolitov ukázali, že obojeIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ systémy vykazovali aktívnu enzýmovú aktivitu do 7. dňa, čo trvalo podporuje normálny metabolizmus liečiva.
- (3) Okrem overenia aktivity enzýmov je dôležitým a nevyhnutným krokom pri overovaní užitočnosti modelov in vitro aj dobrá metabolická stabilita.
IPHASE vytvorila tri kategórie HepatoMax™, HepatoCon™ a stromálnych buniek na stanovenie metabolickej stability tolbutimidu počas 80 hodín s použitím adherovaných primárnych ľudských hepatocytov ako príkladu, ktoré boli podávané 3 dni po resuscitácii primárnych buniek.hepatocyts, a výsledky ukázali, že obajaIPHASE-HepatoMax™ aIPHASE-HepatoCon™ oba systémy vykazovali robustnú aktivitu metabolického klírensu v rámci najdlhšej hodnoty času testu.
Stručne povedané, IPHASE, ako líder v oblasti bio-reagentov in vitro, sa vyvinulIPHASE HepatoMax™ aIPHASE HepatoCon™ in vitro modely založené na nástenných primárnych ľuďoch, opiciach, psovi, potkanoch a myšiachhepatocyts a stromálnymi bunkami rôznych rodov, s vynikajúcim metabolickým obratom, aktívnymi enzýmovými aktivitami a silnými metabolickými klírensovými aktivitami, ktoré našim zákazníkom ponúkajú nové možnosti pri vývoji liekov s nízkym klírensom a sú nepostrádateľným partnerom pri realizácii objavovania liekov! TheIPHASE HepatoMax™ aIPHASE HepatoCon™ modely in vitro ponúkajú vynikajúce rýchlosti metabolického obratu, aktivity aktívnych enzýmov a silné aktivity metabolického klírensu, poskytujú zákazníkom nové možnosti vývoja liekov s nízkym-klírensom a sú dôležitým partnerom pri objavovaní liekov!
Referencia:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R. S. a kol. Nová reléová metóda na určovanie hodnôt nízkych hodnôt [J]. Metabolizmus a dispozícia liečiv, 2012, 40(9): 1860-1865.
Čas príspevku: 2024-07-19 17:20:41