Kadangi vaistus metabolizuojančių fermentų aktyvumas laipsniškai mažėja ilgėjant inkubacijos laikui in vitro, tradiciniai in vitro metabolizmo modeliai turi tokius apribojimus, kaip trumpas inkubacijos laikas, maža metabolinė konversija ir aukšta apatinė aptikimo riba (kiekybinė apatinė CLint tyrimo riba yra 2,5 μL / (min · 106 ląstelės)), todėl negalima tiksliai numatyti lėtai metabolizuojamų vaistų CLint.[1]. Tuo tarpuhepatocitųs turi daugiau fermentų, reikalingų oksidacijos, redukcijos, hidrolizės ir dimerizacijos reakcijoms, palyginti sukepenų mikrosomos, o in vitro sistemose daugelis naujų modelių linkę optimizuoti remiantishepatocitų sistemą ir toliau imituoti in vivo aplinką, kad pailgėtų fermento aktyvumo išlaikymashepatocitųs, o inkubacijos laiko pailgėjimas suteikia galimybę stebėti pakankamą lėtai metabolizuojančių vaistų metabolinę transformaciją[1,2].
Atsižvelgiant į tai, IPHASE, kaip biologinių reagentų, skirtų in vitro tyrimams, lyderė, pradėjo kurti HepatoMax™ System ir HepatoCon™ Media System, pagrįstą prilipusių pirminių hepatocitų ir įvairių genčių stromos ląstelių tyrimais, įskaitant žmonių, beždžionių, šunų, žiurkių, pelių ir kt.hepatocitųs kaip pavyzdys, ir abi sistemos buvo sukurtos tam tikrų fermentų tipų aktyvumui ir metaboliniam stabilumui nustatyti bei vaisto tolbutamido metabolitų atsako vertės padidėjimui po 10 ir 7 dienų, siekiant patikrinti sistemas. Sistemoms patvirtinti buvo nustatyta metabolitų padidėjimo atsako reikšmė po 10 dienų ir specifinių fermentų tipų aktyvumas ir metabolinis stabilumas po 7 dienų.
- (1) Du sistemingi vaistų patvirtinimo kultūros procesai yra tokie:
IPHASE-HepatoMax™yra sušaldytų pirminių žmogaus hepatocitų ir stromos ląstelių ko-kultūros sistema. Pirminiai žmogaus hepatocitai buvo gaivinami ir inkubuojami su stromos ląstelėmis HepatoP™ terpėje 3 dienas, kad būtų pradėtas vaisto vartojimo tyrimas, o vaisto metabolizmas buvo atliktas HepatoDo™ terpėje be serumo, kuri buvo papildyta tik vaistu, nekeičiant terpės. Iš viso, praėjus 4, 72, 168 ir 240 valandų po vaisto vartojimo, analizei buvo nustatyta vaistų metabolitų pridėtinė vertė.
IPHASE-HepatoCon™Kita vertus, yra sistema, skirta užšaldytiems prilipusiems pirminiams žmogaus hepatocitams kultivuoti HepatoCon™ terpėje. Po pirminio žmogaus gaivinimohepatocitųs, vaisto vartojimo tyrimas buvo atliktas po 3 dienų kultivavimo vien HepatoCon™ terpėje, o paskesnis vartojimo laikas, auginimo sistema ir tyrimo metodika buvo tokie patys kaip ir HepatoMax™ sistemoje.
Tuo tarpu, siekdama užtikrinti rezultatų tikslumą ir griežtumą, IPHASE vienu metu atliko terpės kontrolę (be ląstelių) ir stromos ląstelių kontrolę trimis pakartojimais, o rezultatai parodė, kadIPHASE-HepatoMax™ irIPHASE-HepatoCon™ sistemos sukėlė stiprų maksimalų metabolito atsaką nuo 3 dienos ir kad jie abu parodė stiprų medžiagų apykaitos greitį.
- (2) Vaistų metabolizmas daugiausia priklauso nuo hepatocitųCYP450fermentų sistemą, ir jos aktyvumą galima išmatuoti, kad būtų galima geriau ištirti.
TheIPHASE-HepatoMax™ irIPHASE-HepatoCon™ sistemos turi gerą pritaikomumą.
IPHASE nustatė keturias terpės valdymo kategorijas (be ląstelių), HepatoMax™, HepatoCon™ ir stromos ląsteles. Naudojant sieną-prilipusią pirminį žmogųhepatocitųPavyzdžiui, metabolitas padidina reikšmesCYP1A2, CYP2B6irCYP3A4buvo patikrintos 0, 3 ir 7 dienomis po tohepatocitų3 dienas naudojant finasteridą, bupropioną ir midazolamą kaip substratus. Metabolito padidėjimo reikšmės parodė, kad tiekIPHASE-HepatoMax™ irIPHASE-HepatoCon™ sistemos parodė aktyvų fermentų aktyvumą 7 dieną, nuolat skatindamos normalų vaistų metabolizmą.
- (3) Be fermentų aktyvumo patvirtinimo, geras metabolinis stabilumas taip pat yra svarbus ir būtinas žingsnis patvirtinant in vitro modelių naudingumą.
IPHASE sukūrė tris HepatoMax™, HepatoCon™ ir stromos ląstelių kategorijas, kad nustatytų tolbutimido metabolinį stabilumą per 80 valandų, kaip pavyzdį naudojant prilipusius pirminius žmogaus hepatocitus, kurie buvo skirti praėjus 3 dienoms po pirminio gaivinimo.hepatocitųs, o rezultatai parodė, kad tiekIPHASE-HepatoMax™ irIPHASE-HepatoCon™ Abi sistemos parodė tvirtą metabolinį klirensą per ilgiausią tyrimo laiką.
Apibendrinant galima teigti, kad IPHASE, kaip in vitro bioreagentų lyderė, išsivystėIPHASE HepatoMax™ irIPHASE HepatoCon™ in vitro modeliai, pagrįsti pirminiais žmogaus, beždžionių, šunų, žiurkių ir pelių sienelėmishepatocitųs ir įvairių genčių stromos ląstelės, pasižyminčios puikia medžiagų apykaitos apykaita, aktyvia fermentų veikla ir galinga metabolinio klirenso veikla, kurios siūlo naujus pasirinkimus mūsų klientams kurti mažo klirenso vaistus ir yra nepakeičiamas partneris siekiant atrasti vaistus! TheIPHASE HepatoMax™ irIPHASE HepatoCon™ In vitro modeliai siūlo puikų metabolizmo apykaitos greitį, aktyvų fermentų aktyvumą ir stiprią metabolinio klirenso veiklą, todėl klientams suteikiama naujų galimybių kurti mažo klirenso vaistus ir yra svarbus vaistų atradimo partneris!
Nuoroda:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S ir kt. Naujas relės metodas, skirtas mažoms - prošvaisų reikšmėms [J] nustatyti. Vaistų metabolizmas ir dispozicija, 2012, 40(9): 1860-1865.
Įrašo laikas: 2024-07-19 17:20:41