Da lægemiddelmetaboliserende enzymaktiviteter gradvist falder med forlængelse af in vitro -inkubationstid, har traditionelle in vitro -metabolisme -modeller begrænsninger, såsom kort inkubationstid, lav metabolisk konvertering og høj nedre grænse for detektion (den kvantitative nedre grænse for Clint -assay er 2,5 μl /(min. · 106 celler)), som ikke nøjagtigt kan forudsige Clint af langsomt aftabet aftaboliseret lægemiddel[1]. I mellemtiden,hepatocytS har flere enzymer krævet til oxidation, reduktion, hydrolyse og dimeriseringsreaktioner sammenlignet medlevermikrosomer, og i in vitro -systemer, har mange nye modeller en tendens til at blive optimeret baseret påhepatocyt system og efterligner yderligere in vivo -miljøet for at forlænge tilbageholdelsen af enzymaktivitet ihepatocytS og forlængelse af inkubationstiden giver mulighed for at overvåge tilstrækkelig metabolisk transformation af langsom metaboliserende medikamenter[1,2].
I betragtning af dette har iPhase, som førende inden for biologiske reagenser til in vitro -forskning, banebrydende for Hepatomax ™ -systemet og Hepatocon ™ mediesystem baseret på studiet af adhærent primær hepatocytter og stromalceller fra forskellige slægter, herunder humant, abe, hunde, rotte og mus osv. Vedhæftede primære menneskehepatocytS som et eksempel, og begge systemer blev oprettet til bestemmelse af aktiviteten og metabolisk stabilitet af specifikke enzymtyper og stigningen i responsværdi af metabolitter af lægemidlet tolbutamid efter 10 dage og 7 dage for at verificere systemerne. Metabolitforøgelse af responsværdien efter 10 dage og aktivitet og metabolisk stabilitet af specifikke enzymtyper ved 7 dage blev bestemt til at validere systemerne.
- (1) De to systematiske lægemiddelvalideringskulturprocesser er som følger:
IPhase - Hepatomax ™er et co - kultursystem af frosne vægge primære humane hepatocytter og stromale celler. Primære humane hepatocytter blev genoplivet og inkuberet med stromale celler i Hepatop ™ -medium i 3 dage for at starte lægemiddeladministrationsassayet, og stoffet metabolisme blev udført i serum - fri Hepatodo ™ -medium, som kun blev genopfyldt med lægemidlet uden at ændre mediet. I alt 4, 72, 168 og 240 timer efter lægemiddeladministration blev værditilvæksten af lægemiddelmetabolitter bestemt til analyse.
IPhase - Hepatocon ™På den anden side er et system til dyrkning af frosne vedhæftede primære humane hepatocytter i Hepatocon ™ medium. Efter genoplivning af det primære menneskehepatocytS, lægemiddeladministrationsassayet blev udført efter 3 dages kultur i Hepatocon ™ Medium alene, og den efterfølgende administrationstid, kultursystemet og analysemetodikken var det samme som Hepatomax ™ -systemet.
I mellemtiden, for at sikre nøjagtigheden og strengheden i resultaterne, udførte iPhase en medium kontrol (celle - fri) og en stromalcellekontrol på samme tid med tre replikationer, og resultaterne viste, at denIPhase - Hepatomax ™ ogIPhase - Hepatocon ™ Systemer producerede en stærk peak metabolitrespons fra dag 3 og fremefter, og at de begge viste en stærk metabolisk omsætningshastighed.
- (2) Medikamentmetabolisme er hovedsageligt afhængig af hepatocyttenCYP450enzymsystem og dets aktivitet kan måles for bedre at undersøge.
DeIPhase - Hepatomax ™ ogIPhase - Hepatocon ™ Systemer har god anvendelighed.
IPhase oprettede fire kategorier af medium kontrol (ingen celler), Hepatomax ™, Hepatocon ™ og Stromal Celler. Brug af væg - vedhæftede primære menneskehepatocytS som et eksempel øger metaboliterne værdier forCYP1A2, CYP2B6ogCYP3A4blev verificeret på dag 0, 3 og 7 efterhepatocytGendannelse i 3 dage ved hjælp af henholdsvis finasterid, bupropion og midazolam som underlag. Metabolitforøgelsesværdier viste, at beggeIPhase - Hepatomax ™ ogIPhase - Hepatocon ™ Systemer viste aktiv enzymaktivitet på dag 7, hvilket konsekvent fremmer normal lægemiddelmetabolisme.
- (3) Ud over validering af enzymaktivitet er god metabolisk stabilitet også et vigtigt og uundværligt trin i validering af anvendeligheden af in vitro -modeller.
IPhase oprettede tre kategorier af Hepatomax ™, Hepatocon ™ og Stromale celler for at bestemme den metaboliske stabilitet af tolbutimid over en periode på 80 timer ved hjælp af vedhærende primære humane hepatocytter som et eksempel, som blev administreret 3 dage efter genoplivning af primærhepatocyts, og resultaterne viste, at bådeIPhase - Hepatomax ™ ogIPhase - Hepatocon ™ Systemer viste begge robust metabolisk clearance -aktivitet inden for den længste værdi af assaytiden.
Sammenfattende har iphase, som førende inden for in vitro bio - reagenser, udvikletIPhase Hepatomax ™ ogIPhase Hepatocon ™ In vitro -modeller baseret på væg - påført primært menneske, abe, hunde, rotte og mushepatocytS- og stromalceller fra forskellige slægter, med fremragende metabolisk omsætning, aktive enzymaktiviteter og kraftfulde metaboliske clearance -aktiviteter, der tilbyder nye valg for vores kunder at udvikle lav - clearance -lægemidler og er en uundværlig partner til at realisere opdagelse af narkotika! DeIPhase Hepatomax ™ ogIPhase Hepatocon ™ In vitro -modeller tilbyder fremragende metaboliske omsætningshastigheder, aktive enzymaktiviteter og stærke metaboliske clearance -aktiviteter, hvilket giver nye muligheder for kunderne til at udvikle lav - clearance -lægemidler og er en vigtig partner inden for opdagelse af stoffer!
Reference:
[1] 阮婷婷, 鞠武建, 熊海伟, 等. 低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展 [J]. 中国药科大学学报, 2019 (2): 152 - 160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. En ny relæ -metode til bestemmelse af lave - clearance -værdier [J]. Drug Metabolism and Disposition, 2012, 40 (9): 1860 - 1865.
Posttid: 2024 - 07 - 19 17:20:41