Δεδομένου ότι οι ενζυμικές δραστηριότητες των ενζυμικών φαρμάκων μειώνονται σταδιακά με την παράταση του χρόνου επώασης in vitro, τα παραδοσιακά μοντέλα μεταβολισμού in vitro έχουν περιορισμούς, όπως ο μικρός χρόνος επώασης, η χαμηλή μεταβολική μετατροπή και το υψηλό κατώτερο όριο ανίχνευσης (το ποσοτικό χαμηλότερο όριο της δοκιμασίας κλινικής είναι 2,5 μL /[1]. Εν τω μεταξύ,ηπατοκύτταροS έχουν περισσότερα ένζυμα που απαιτούνται για αντιδράσεις οξείδωσης, μείωσης, υδρόλυσης και διμερισμού σε σύγκριση μεμικροσώματα ήπατος, και σε in vitro συστήματα, πολλά νέα μοντέλα τείνουν να βελτιστοποιούνται με βάση τοηπατοκύτταρο σύστημα και περαιτέρω μιμούνται το in vivo περιβάλλον για να παρατείνει τη διατήρηση της ενζυμικής δραστηριότητας στοηπατοκύτταροS, και η παράταση του χρόνου επώασης παρέχει τη δυνατότητα παρακολούθησης επαρκούς μεταβολικού μετασχηματισμού αργών μεταβολικών φαρμάκων[1,2].
Λαμβάνοντας υπόψη αυτό, η IPhase, ως ηγέτης σε βιολογικά αντιδραστήρια για in vitro έρευνα, πρωτοστάτησε στο σύστημα Hepatomax ™ και στο σύστημα μέσων Hepatocon ™ με βάση τη μελέτη του συστήματος προσκολλημένου πρωτοβάθμιου ηπατοκυττάρων και των στενών κυττάρων των διαφόρων γένη, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπινων, πιθήκων, σκύλων, αρουραίου και ποντικού.ηπατοκύτταροS ως παράδειγμα, και τα δύο συστήματα δημιουργήθηκαν για τον προσδιορισμό της δραστικότητας και της μεταβολικής σταθερότητας συγκεκριμένων τύπων ενζύμων και την αύξηση της τιμής απόκρισης των μεταβολιτών του φαρμάκου τολβουταμίδη σε 10 ημέρες και 7 ημέρες για να επαληθεύσουν τα συστήματα. Η τιμή απόκρισης του μεταβολίτη σε 10 ημέρες και η δραστηριότητα και η μεταβολική σταθερότητα συγκεκριμένων τύπων ενζύμων σε 7 ημέρες προσδιορίστηκαν για την επικύρωση των συστημάτων.
- (1) Οι δύο συστηματικές διαδικασίες καλλιέργειας επικύρωσης φαρμάκων έχουν ως εξής:
IPhase - Hepatomax ™είναι ένα σύστημα καλλιέργειας με κατεψυγμένα περιφραγμένα πρωτεύοντα ανθρώπινα ηπατοκύτταρα και στρωματικά κύτταρα. Τα πρωτογενή ανθρώπινα ηπατοκύτταρα αναζωογονήθηκαν και επωάστηκαν με στρωματικά κύτταρα σε μέσο Hepatop ™ για 3 ημέρες για να ξεκινήσει η δοκιμασία χορήγησης φαρμάκου και ο μεταβολισμός του φαρμάκου διεξήχθη στον ορό - Ελεύθερο μέσο Hepatodo ™, το οποίο αναπληρώθηκε μόνο με το φάρμακο χωρίς να αλλάξει το μέσο. Συνολικά 4, 72, 168 και 240 ώρες μετά τη χορήγηση φαρμάκου, προσδιορίστηκε η προστιθέμενη αξία των μεταβολιτών φαρμάκων για ανάλυση.
IPhase - Hepatocon ™, από την άλλη πλευρά, είναι ένα σύστημα για την καλλιέργεια κατεψυγμένων προσκολλημένων ανθρώπινων ηπατοκυττάρων στο μέσο Hepatocon ™. Μετά την αναζωογόνηση του πρωταρχικού ανθρώπουηπατοκύτταροS, η δοκιμασία χορήγησης φαρμάκων διεξήχθη μετά από 3 ημέρες καλλιέργειας στο μέσο Hepatocon ™ μόνο και ο επακόλουθος χρόνος χορήγησης, το σύστημα καλλιέργειας και η μεθοδολογία ανάλυσης ήταν η ίδια με εκείνη του συστήματος Hepatomax ™.
Εν τω μεταξύ, για να εξασφαλιστεί η ακρίβεια και η αυστηρότητα των αποτελεσμάτων, η iPhase πραγματοποίησε ένα μεσαίο έλεγχο (κύτταρο - ελεύθερο) και ένα στρωματικό έλεγχο κυττάρων ταυτόχρονα, με τρεις αναπαραγωγές και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τοIPhase - Hepatomax ™ καιIPhase - Hepatocon ™ Τα συστήματα παρήγαγαν μια ισχυρή απόκριση μεταβολίτη αιχμής από την ημέρα 3 και μετά, και ότι και οι δύο έδειξαν ένα ισχυρό ποσοστό μεταβολικού κύκλου εργασιών.
- (2) Ο μεταβολισμός των φαρμάκων εξαρτάται κυρίως από το ηπατοκύτταροCYP450Το σύστημα ενζύμου και η δραστηριότητά του μπορούν να μετρηθούν για να εξεταστούν καλύτερα.
ΟIPhase - Hepatomax ™ καιIPhase - Hepatocon ™ Τα συστήματα έχουν καλή εφαρμογή.
Το iPhase ρύθμισε τέσσερις κατηγορίες μέσου ελέγχου (χωρίς κύτταρα), Hepatomax ™, Hepatocon ™ και στρωματικά κύτταρα. Χρήση τοίχου - Προσκολλημένος πρωτογενής άνθρωποςηπατοκύτταροως παράδειγμα, οι τιμές αύξησης του μεταβολίτηCYP1A2, CYP2B6καιCYP3A4επαληθεύτηκαν την ημέρα 0, 3 και 7 μετάηπατοκύτταροανάκτηση για 3 ημέρες χρησιμοποιώντας finasteride, bupropion και μιδαζολάμη ως υποστρώματα, αντίστοιχα. Οι τιμές αύξησης του μεταβολίτη έδειξαν ότι και οι δύοIPhase - Hepatomax ™ καιIPhase - Hepatocon ™ Τα συστήματα έδειξαν δραστική δραστικότητα ενζύμου μέχρι την ημέρα 7, προωθώντας με συνέπεια τον φυσιολογικό μεταβολισμό των φαρμάκων.
- (3) Εκτός από την επικύρωση της ενζυμικής δραστηριότητας, η καλή μεταβολική σταθερότητα είναι επίσης ένα σημαντικό και απαραίτητο βήμα στην επικύρωση της χρησιμότητας των in vitro μοντέλων.
Το iPhase δημιούργησε τρεις κατηγορίες Hepatomax ™, Hepatocon ™ και Stromal Cells για τον προσδιορισμό της μεταβολικής σταθερότητας του τολβουτίμ για μια περίοδο 80 ωρών χρησιμοποιώντας προσκολλημένα πρωτογενή ανθρώπινα ηπατοκύτταρα ως παράδειγμα, τα οποία χορηγήθηκαν 3 ημέρες μετά την ανάνηψη της πρωτοβάθμιαςηπατοκύτταροs, και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι και τα δύοIPhase - Hepatomax ™ καιIPhase - Hepatocon ™ Τα συστήματα και τα δύο έδειξαν ισχυρή δραστηριότητα μεταβολικής εκκαθάρισης εντός της μεγαλύτερης αξίας του χρόνου ανάλυσης.
Συνοπτικά, η IPHASE, ως ηγέτης σε in vitro bio - αντιδραστήρια, έχει αναπτυχθείIPhase Hepatomax ™ καιIPhase Hepatocon ™ in vitro μοντέλα που βασίζονται στον τοίχο - Εφαρμοσμένο πρωτογενές ανθρώπινο, πιθήκους, σκύλο, αρουραίους και ποντίκιηπατοκύτταροS και τα στρωματικά κύτταρα διαφόρων γένη, με εξαιρετικό μεταβολικό κύκλο εργασιών, ενεργές ενζυμικές δραστηριότητες και ισχυρές δραστηριότητες μεταβολικής εκκαθάρισης, οι οποίες προσφέρουν νέες επιλογές για τους πελάτες μας να αναπτύξουν χαμηλά φάρμακα εκκαθάρισης και είναι ένας απαραίτητος συνεργάτης για την πραγματοποίηση της ανακάλυψης φαρμάκων! ΟIPhase Hepatomax ™ καιIPhase Hepatocon ™ Τα in vitro μοντέλα προσφέρουν εξαιρετικά ποσοστά μεταβολικού κύκλου εργασιών, ενεργές ενζυμικές δραστηριότητες και ισχυρές δραστηριότητες μεταβολικής εκκαθάρισης, παρέχοντας νέες επιλογές για τους πελάτες να αναπτύξουν φάρμακα χαμηλής εκκαθάρισης και είναι σημαντικοί συνεργάτες στην ανακάλυψη φαρμάκων!
Αναφορά:
[1] 阮婷婷, 鞠武建, 熊海伟, 等.
[2] DI L, Trapa Ρ, Obach R S, et αϊ. Μια νέα μέθοδος αναμετάδοσης για τον προσδιορισμό των χαμηλών τιμών εκκαθάρισης [J]. Μεταβολισμός και διάθεση φαρμάκων, 2012, 40 (9): 1860 - 1865.
Χρόνος δημοσίευσης: 2024 - 07 - 19 17:20:41