Since the drug metabolizing enzyme activities gradually decrease with the prolongation of in vitro incubation time, traditional in vitro metabolism models have limitations such as short incubation time, low metabolic conversion and high lower limit of detection (the quantitative lower limit of CLint assay is 2.5 μL /( min·106 cells)), which can not accurately predict CLint of slowly metabolized drugs[1]. Under tiden,hepatocyts har fler enzymer som krävs för oxidation, reduktion, hydrolys och dimeriseringsreaktioner jämfört medlevermikrosomeroch i in vitro -system tenderar många nya modeller att optimeras baserat påhepatocyt systemet och efterliknar in vivo -miljön in vivo för att förlänga kvarhållningen av enzymaktivitethepatocyts och förlängningen av inkubationstiden ger möjligheten att övervaka tillräcklig metabolisk omvandling av långsamma metaboliserande läkemedel[1,2].
In view of this, IPHASE, as a leader in biological reagents for in vitro research, has pioneered the HepatoMax™ System and HepatoCon™ Media System based on the study of adherent primary hepatocytes and stromal cells of various genera, including human, monkey, canine, rat, and mouse, etc. The HepatoMax™ System and HepatoCon™ Media System were developed using the adherent primary humanhepatocytsom ett exempel, och båda systemen inrättades för bestämning av aktiviteten och metabolisk stabilitet för specifika enzymtyper och ökningen av svarsvärdet för metaboliter för läkemedlet tolbutamid vid 10 dagar och 7 dagar för att verifiera systemen. Metabolitökningens svarsvärde vid 10 dagar och aktivitet och metabolisk stabilitet för specifika enzymtyper vid 7 dagar bestämdes för att validera systemen.
- (1) De två systematiska läkemedelsvalideringskulturprocesserna är följande:
IPhase - Hepatomax ™är ett samarbetssystem av frysta muromgärdade primära humana hepatocyter och stromalceller. Primära humana hepatocyter återupplivades och inkuberades med stromalceller i Hepatop ™ medium under 3 dagar för att starta läkemedelsadministrationsanalysen, och metabolismen av läkemedlet utfördes i serum - Free Hepatodo ™ Medium, som endast fylldes med läkemedlet utan att förändra mediet. Totalt 4, 72, 168 och 240 timmar efter läkemedelsadministrering bestämdes värdet för läkemedelsmetaboliter för analys.
IPhase - Hepatocon ™Å andra sidan finns ett system för att odla frysta vidhäftande primära humana hepatocyter i Hepatocon ™ -medium. Efter att ha återupplivat den primära människanhepatocytS, läkemedelsadministrationsanalysen utfördes efter 3 dagars kultur i Hepatocon ™ medium ensam, och den efterföljande administreringstiden, kultursystemet och analysmetodiken var desamma som Hepatomax ™ -systemet.
Samtidigt, för att säkerställa noggrannheten och striktheten i resultaten, utförde ifas en medelstor kontroll (cell - fri) och en stromal cellkontroll samtidigt, med tre replikationer, och resultaten visade attIPhase - Hepatomax ™ ochIPhase - Hepatocon ™ System producerade ett starkt toppmetabolitrespons från dag 3 och framåt, och att de båda visade en stark metabolisk omsättning.
- (2) Läkemedelsmetabolism är huvudsakligen beroende av hepatocytenCYP450Enzymsystem och dess aktivitet kan mätas för att bättre undersöka.
DeIPhase - Hepatomax ™ ochIPhase - Hepatocon ™ System har god användbarhet.
IPhase inrättade fyra kategorier av medelstora kontroller (inga celler), Hepatomax ™, Hepatocon ™ och stromalceller. Använda vägg - vidhäftande primär människahepatocyts som ett exempel ökar metaboliten värdena påCyp1a2, Cyp2b6ochCyp3a4verifierades på dag 0, 3 och 7 efterhepatocytÅterställning under 3 dagar med hjälp av finasterid, bupropion och midazolam som underlag respektive. Metabolitökningsvärden visade att bådaIPhase - Hepatomax ™ ochIPhase - Hepatocon ™ System visade aktiv enzymaktivitet på dag 7, vilket konsekvent främjar normal läkemedelsmetabolism.
- (3) Förutom valideringen av enzymaktivitet är god metabolisk stabilitet också ett viktigt och nödvändigt steg för att validera användbarheten av in vitro -modeller.
IPhase inrättade tre kategorier av Hepatomax ™, Hepatocon ™ och stromalceller för att bestämma den metaboliska stabiliteten för tolbutimid under en period av 80 timmar med användning av vidhäftande primära människa hepatocyter som ett exempel, som administrerades 3 dagar efter återupplivning av primärhepatocyts, och resultaten visade att bådaIPhase - Hepatomax ™ ochIPhase - Hepatocon ™ System visade båda robust metabolisk clearance -aktivitet inom det längsta värdet på analystiden.
Sammanfattningsvis har iPhase, som ledande inom in vitro -biogaver, utvecklatsIPhase Hepatomax ™ ochIPhase Hepatocon ™ In vitro -modeller baserade på vägg - applicerad primär mänsklig, apa, hund, råtta och mushepatocytS och stromalceller från olika släkten, med utmärkt metabolisk omsättning, aktiva enzymaktiviteter och kraftfulla metaboliska clearance -aktiviteter, som erbjuder nya val för våra kunder att utveckla låga - clearance -läkemedel och är en oundgänglig partner för att förverkliga läkemedelsupptäckt! DeIPhase Hepatomax ™ ochIPhase Hepatocon ™ In vitro -modeller erbjuder utmärkta metaboliska omsättningshastigheter, aktiva enzymaktiviteter och starka metaboliska clearance -aktiviteter, vilket ger nya alternativ för kunder att utveckla låga - clearance -läkemedel och är en viktig partner i läkemedelsupptäckten!
Hänvisning:
[1] 阮婷婷, 鞠武建, 熊海伟, 等. 低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展 [J]. 中国药科大学学报, 2019 (2): 152 - 160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. En ny relämetod för att bestämma låga - clearance -värden [J]. Läkemedelsmetabolism och disposition, 2012, 40 (9): 1860 - 1865.
Inläggstid: 2024 - 07 - 19 17:20:41